4.1.5, 4.1.8.1, 4.1.8.3, 5.1.5 ภาคผนวก 1

5. ระยะเวลาที่ใช้ได้ถูกลบออกตามโปรโตคอล N 5-94 ของ Interstate Council for Standardization, Metrology and Certification (IUS 11-12-94)

6. สาธารณรัฐ เมษายน 2553


มาตรฐานนี้ใช้กับอาหารและผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก และกำหนดวิธีการสำหรับการตรวจหาจุลินทรีย์กรดแลคติกที่มีชีวิตและจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) รวมถึงวิธีการกำหนดในผลิตภัณฑ์อาหาร ( ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลกติก) แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Leuconostoc, group N streptococci ของจีนัส Streptococcus, Pediococcus, S. thermophilus และการหาจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ของแบคทีเรียสกุลแลคโตบาซิลลัส

วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการเพาะผลิตภัณฑ์จำนวนหนึ่งและ (หรือ) การเจือจางในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกของเหลวหรือวุ้น การปลูกพืชภายใต้สภาวะที่เหมาะสม และหากจำเป็น ให้พิจารณาคุณสมบัติทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของจุลินทรีย์ที่ตรวจพบและนับจำนวนพวกมัน

วิธีการนี้มีไว้สำหรับ:

การสร้างความสอดคล้องตามตัวบ่งชี้ทางจุลชีววิทยาของคุณภาพของอาหารและผลิตภัณฑ์นมเปรี้ยว การเพาะเลี้ยงเริ่มต้น ความเข้มข้นของแบคทีเรียและการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติกตามข้อกำหนดของเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิค

การทำให้ปลอดเชื้อทางอุตสาหกรรมของอาหารกระป๋อง

ระบุสาเหตุของความบกพร่องของอาหาร

1. การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมการ

1. การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมการ

1.1. การเลือกและการเตรียมตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหาร ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมเปรี้ยว ตามมาตรฐาน GOST 26668, GOST 26669

การสุ่มตัวอย่างผลิตภัณฑ์นมหมัก (แบบแห้งและแบบน้ำ) การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติค และการเตรียมสำหรับการวิเคราะห์ - ตามมาตรฐาน GOST 9225*
________________
GOST R 53430-2009

1.2. ตรวจสอบการรั่วไหลของอาหารกระป๋อง - ตาม GOST 8756.18

อาหารกระป๋องเต็มรูปแบบ ลักษณะปกติ ถูกควบคุมอุณหภูมิก่อนการทดสอบที่อุณหภูมิ 30-37 ° C ในภาชนะที่มีความจุสูงถึง 1 dm รวมเป็นเวลาอย่างน้อย 5 วัน ในภาชนะที่มีความจุมากกว่า 1 dm - สำหรับที่ อย่างน้อย 7 วัน

ผลิตภัณฑ์อาหารที่จำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติคถูกทำให้เป็นมาตรฐานจะไม่อยู่ภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ

การเจือจางผลิตภัณฑ์จัดทำขึ้นในสารละลายเกลือเปปโตนตามมาตรฐาน GOST 26669

การเจือจางครั้งแรกของผลิตภัณฑ์ที่มี NaCl มากกว่า 5% เตรียมโดยใช้น้ำเปปโตน การเจือจางเบื้องต้นของปลาและผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์เตรียมโดยใช้น้ำเกลือ

2. อุปกรณ์ วัสดุ และน้ำยา

สำหรับการทดสอบ มีการใช้อุปกรณ์ วัสดุ รีเอเจนต์ตามมาตรฐาน GOST 10444.1, GOST 9225 และสิ่งต่อไปนี้:

GOST 24104 * พร้อมขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 ก. และค่าความผิดพลาดสูงสุดที่อนุญาตคือ ±2 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักรีเอเจนต์)
________________
GOST 24104-2001 GOST R 53228-2008


เครื่องชั่งสำหรับห้องปฏิบัติการเอนกประสงค์ที่มีคุณสมบัติทางมาตรวิทยาตามมาตรฐาน GOST 24104 * โดยมีขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 กรัม และขีดจำกัดข้อผิดพลาด ± 15 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักผลิตภัณฑ์)
________________
* ตั้งแต่วันที่ 1 กรกฎาคม 2545 GOST 24104-2001 มีผลบังคับใช้ ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย GOST R 53228-2008 นั้นถูกต้อง


กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงชีวภาพพร้อมอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสหรือยี่ห้ออื่นที่คล้ายคลึงกัน

ครอบแว่นตาตาม GOST 6672;

สไลด์แก้วตาม GOST 9284;

เทอร์โมสตัทที่มีช่วงอุณหภูมิในการทำงาน 28-55 °С ซึ่งช่วยให้รักษาอุณหภูมิที่ตั้งไว้โดยมีข้อผิดพลาด ±1 °С

ปลั๊กก๊อกตาม GOST 5541;

แว่นขยายแบบพับได้เพิ่มขึ้น 4-10 เท่าตาม GOST 25706

ตับอ่อนสำหรับการเตรียมแบคทีเรียและไวรัส

คลอโรฟอร์มทางเทคนิคตาม GOST 20015;

นมพร่องมันเนยที่มีความเป็นกรดไม่เกิน 19°T ที่ได้จากนมวัวที่เก็บเกี่ยวไม่ต่ำกว่าเกรด 2 ตาม GOST 13264 * หรือนมผงพร่องมันเนยตาม GOST 10970 **
________________
* GOST R 52054-2003 มีผลบังคับใช้ในดินแดนของสหพันธรัฐรัสเซีย
** ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย ใช้ GOST R 52791-2007


แอล-อาร์จินีน ไฮโดรคลอไรด์;

เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก

โพแทสเซียมซิเตรต

คาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส;

แฝด-80;

โซเดียมอะซิเตต

แอมโมเนียมซิเตรต

แมกนีเซียมซัลเฟต (MgSO 7H2O);

แมงกานีสซัลเฟต (MnSO 2H2O);

แมงกานีสซัลเฟต (MnSO 4H2O);

กรดซอร์บิก

นิโกรซีน;

ฟีนอล

3. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

3.1. การเตรียมสารละลายรีเอเจนต์และอินดิเคเตอร์สำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

3.1.1. ตัวบ่งชี้ Bromocresol สีม่วง, สารละลายที่มีความเข้มข้นมวล 1 g / dm3: ถ่ายโอน bromocresol สีม่วง 0.1 กรัม, ล้างด้วยน้ำกลั่นที่ปราศจากเชื้อ, ลงในจานวัดปริมาตร 100 มล. โดยปฏิบัติตามกฎปลอดเชื้อและปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย ด้วยน้ำเดียวกัน. สารละลายจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.2. แคลเซียมคาร์บอเนต, สารแขวนลอยในน้ำที่มีความเข้มข้นมวล 30 g / dm3: แคลเซียมคาร์บอเนต 3 กรัม, ฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1, ถ่ายโอน, ล้างด้วยน้ำกลั่น, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3, ปริมาตรคือ ปรับเป็นเครื่องหมาย สารแขวนลอยถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 20 นาที การระงับจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.3. Carbol fuchsin สารละลายเข้มข้น: ฟูคซิน 1 กรัมผสมกับเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 10 มล. และสารละลายฟีนอล 100 มล. ที่มีความเข้มข้น 50 กรัมต่อเดซิเมตร

ในการเตรียมสารละลายคาร์โบลฟุชซินที่ใช้งานได้ให้เติมน้ำกลั่น 90 มล. ลงในสารละลายเข้มข้นของคาร์โบลฟุชซิน 10 มล.

3.1.4. สารละลายคริสตัลไวโอเลตที่มีมวลความเข้มข้น 10 g / dm3: คริสตัลไวโอเล็ต 1 กรัมถูกถ่ายโอน ล้างด้วยน้ำกลั่น ลงในภาชนะตวงขนาด 100 มล. ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย สารละลายจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.5. สารแขวนลอยไนโกรซีนที่มีความเข้มข้นมวล 100 g/dm3: 10 g ของ nigrosine ถูกถ่ายโอน, ล้างออกด้วยน้ำกลั่น, ลงในภาชนะวัดที่มีความจุ 100 cm3, ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย, ให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 45- 50 ° C ในอ่างน้ำแล้วกรองผ่านตัวกรองผ้าฝ้าย

3.1.6. สารละลายเกลือเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.7. น้ำเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.8. กรดซอร์บิก, สารละลายอัลคาไลน์: โอนกรดซอร์บิก 1 กรัม, ล้างด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ NaOH = 1 โมล / dm, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 มล., ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมายด้วยสารละลายเดียวกัน . สารละลายที่ได้จะถูกฆ่าเชื้อโดยการกรองเมมเบรนตามมาตรฐาน GOST 26670

อนุญาตให้เตรียมสารละลายกรดซอร์บิกโดยไม่ต้องกรองตามกฎของ asepsis ในขณะที่เตรียมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

3.1.9. รีเอเจนต์สำหรับการตรวจหาไซโตโครม: เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก 1 กรัมละลายในกรดกลาเซียลอะซิติก 99.8% 20 ซม. 3 เติมน้ำกลั่น 30 ซม. 3 และทำให้ร้อนช้าๆ หลังจากเย็นลง 50 ซม. 3 ของเอทิลแอลกอฮอล์ 96% จะถูกเติม เพื่อแก้ปัญหา วิธีการแก้ปัญหาจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลา 1 เดือน

3.1.10. สารละลายทางสรีรวิทยาจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลกติก)

3.2.1. สื่อความหนาแน่นของ Blikfeldt จัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.2. สื่อของ Blikfeldt เป็นของเหลว: แลคโตส 10 กรัม, กลูโคส 10 กรัม, เปปโตน 5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 950 cm3 ต้มและกรองผ่านตัวกรองกระดาษ สารสกัดจากยีสต์ 20 มล. สารละลายบรอมครีซอลสีม่วง 32 มล. ตามข้อ 3.1.1 ถูกเติมลงในตัวกรอง ตั้งค่า pH เป็น 7.3 ± 0.1 เทลงในหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (117 ± 1) ° C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.3. Medium Briggs แก้ไขโดย Sharp:

เปปโตน 15 กรัม, กลูโคส 20 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม., โซเดียมอะซิเตต 5 กรัม, โพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนเบสิก 5 กรัม, แอมโมเนียมซิเตรต 2 กรัม, น้ำมะเขือเทศ 100 ซม. เติมน้ำกลั่น 875 ซม. 3 ( สมมติว่าน้ำผลไม้มีของแข็งที่ละลายน้ำได้ไม่น้อยกว่า 4.5% ถ้าน้ำมะเขือเทศมีปริมาณของแข็งต่างกัน ให้คำนวณใหม่เป็นของแข็ง 4.5%) 1 ซม. ทวีน-80 สารละลายเกลือ 5 ซม. (MgSO 7H2O - 11.5 g, MnSO 4H2O - 2.86 g, FeSO 7H2O - 0.68 g, น้ำกลั่นสูงถึง 100 ซม.), วุ้น 15 กรัม

ต้มส่วนผสมด้วยไฟอ่อนจนวุ้นละลายหมด ตั้งค่า pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.5 ± 0.1) สื่อถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (115 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที

3.2.4. ยีสต์ขนาดกลาง: ในสารสกัดจากยีสต์ 100 cm3 ที่เตรียมตาม GOST 10444.1 เติมน้ำกลั่น 900 cm3 แคลเซียมคาร์บอเนต 10 กรัมฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1 และซูโครส 100 กรัม ส่วนผสมได้รับความร้อนจนกระทั่งซูโครสละลาย ค่า pH จะถูกปรับเพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (7.1 ± 0.1) เทลงในหลอดทดลองขนาด 10 ซม. และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที

3.2.5. วุ้นกะหล่ำปลีจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.6. สื่อ MPC เหลว: เปปโตน 10 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 20 มล., กลูโคส 20.0 กรัม, ทวีน-80 1.0 มล., โพแทสเซียมฟอสเฟต dibasic 2.0 กรัม, โซเดียมอะซิเตต 5.0 กรัมใส่ในขวดวัดปริมาตรที่มีความจุ 1.0 dm3 , ไตรแอมโมเนียมซิเตรต 2.0 กรัม, แมกนีเซียมซัลเฟต 0.2 กรัม, แมงกานีสซัลเฟต 0.05 กรัม (MnSO 4H2O) เติมน้ำเนื้อลงในเครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำ และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.2 ± 0.1) สื่อถูกเทลงในหลอดทดลองปลอดเชื้อขนาด 10 ซม. และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที หลอดทดลองที่มีสารอาหารอยู่จะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C เป็นเวลาไม่เกิน 30 วัน

3.2.7. อาหารเลี้ยงเชื้อ MPC จัดทำขึ้นตามสูตรที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.6 โดยเติมวุ้น 15-18 กรัม หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที สื่อที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C เป็นเวลาไม่เกิน 30 วัน

หากจำเป็น เพื่อเพิ่มความสามารถในการเลือก หลังจากการฆ่าเชื้อ ให้เติมสารละลายด่างของกรดซอร์บิก 1 ซม. 3 ตามข้อ 3.1.8 ถึง 1 dm ของวุ้นหรืออาหารเหลว

3.2.8. น้ำซุปเปปโตนเนื้อปานกลาง pH 9.6:

ในน้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่เตรียมตาม GOST 10444.1 ค่า pH จะถูกตั้งค่าโดยใช้สารละลายอัลคาไลและกรดตาม GOST 10444.1 ดังนั้นหลังจากการฆ่าเชื้อแล้วจะอยู่ที่ 9.6 ที่ 25 ° C สื่อถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.9. น้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 6.5% จัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1 แต่ในระหว่างการเตรียมปริมาณโซเดียมคลอไรด์ที่เพิ่มเข้าไปจะเพิ่มขึ้นเป็น 65 กรัมต่อสื่อ 1 dm

3.2.10. สารอาหารวุ้นที่มีน้ำตาลซูโครส:

ซูโครส 100.0 กรัม, วุ้น 15.0 กรัมเติมลงในน้ำซุปเปปโตนเนื้อ 1 dm กวนเป็นครั้งคราวส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนจนเดือดและส่วนประกอบทั้งหมดจะละลายหมด

สื่อถูกทำให้เย็นลงที่ 45-55 °C และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (7.1 ± 0.1)

เทสื่อลงในขวดและฆ่าเชื้อเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C หลังจากการฆ่าเชื้อและตรวจสอบค่า pH แล้ว อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกผสมให้เข้ากันและเทลงในจานเลี้ยงเชื้อ ซึ่งเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4±1) °C เป็นเวลาไม่เกิน 14 วัน

3.2.11. สื่อของ Reddy: ฐานปานกลาง - เติมวุ้น 15.0 กรัมลงในขวดที่มีน้ำกลั่น 500 มล. และอุ่นในอ่างน้ำจนกว่าวุ้นจะละลาย เติมโพแทสเซียมซิเตรต 10.0 กรัมและคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส 15.0 กรัมลงในขวดอีกใบที่มีน้ำกลั่น 500 มล. แล้วละลายด้วยความร้อน ผสมส่วนผสมของขวดทั้งสองและเปปโทน 3.0 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม. 3 โพแทสเซียมฟอสเฟตไดเบสิก 1.25 กรัม เติมแอล-อาร์จินีนไฮโดรคลอไรด์ 5.0 กรัม อุ่นในอ่างน้ำจนกว่าส่วนประกอบจะละลายหมด เย็นลง อุณหภูมิ 45-55 °C และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.3 ± 0.2) เบสขนาดกลางฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C ไม่เกิน 30 วัน

ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ ให้เติมนมพร่องมันเนย 5.0 ซม.3 สารแขวนลอยของแคลเซียมคาร์บอเนต 100 ซม.3 ที่มีความเข้มข้นมวล 30 กรัม/ลบ.ม. และสารละลายบรอมครีซอลม่วง 2 ซม.3 ที่มีมวลความเข้มข้น 1 กรัม/ลบ.ม. ถึง 1 dm ของฐานละลายและเย็นลงถึง 45-55 ° C

3.2.12. ธูปฤาษีเหลว: เปปโตน 10.0 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 25.0 มล., กลูโคส 20.0 กรัม, ทวีน-80 1.0 มล., โพแทสเซียมฟอสเฟตเชิงเดี่ยว 6.0 กรัม, แอมโมเนียมซิเตรต 2, 0 กรัม, โซเดียมอะซิเตต 25.0 กรัม, อะซิติกน้ำแข็ง 1.32 ซม. กรด, 0.575 g แมกนีเซียมซัลเฟต, 0.12 g แมงกานีสซัลเฟต (MnSO 2H2O), 0.034 g เหล็กซัลเฟต, เติมน้ำกลั่นลงในเครื่องหมาย, ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำและปรับค่า pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้อจะอยู่ที่ 25 ° C (5.4 ± 0.1) สื่อถูกเทลงในหลอดทดลองปลอดเชื้อขนาด 10 ซม. และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที หลอดทดลองที่มีสารอาหารอยู่จะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C เป็นเวลาไม่เกิน 30 วัน

3.2.13. อาหารเลี้ยงเชื้อ Rogosa เตรียมตามสูตรที่อธิบายไว้ในวรรค 3.2.12 โดยเติมวุ้น 20.0 กรัม หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 15 นาที สื่อที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C เป็นเวลาไม่เกิน 30 วัน

3.2.14. น้ำมะเขือเทศจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.15. สื่อสำหรับการตรวจหา pseudocatalase: 5.0 * เปปโตน, สารสกัดจากยีสต์ 25 มล., ทวีน-80 0.5 มล., 0.1 กรัม (MnSO 4H2O), น้ำตาลกลูโคส 0.5 กรัม, วุ้น 15 กรัมใส่ในขวดวัดปริมาตรที่มีความจุ 1 dm เติมน้ำซุปเปปโทนเนื้อสัตว์ที่เครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำ และตั้งค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.9 ± 0.1) เทสื่อลงในหลอดทดลองขนาด 5-7 ซม. และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121±1) °C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากการฆ่าเชื้อ หลอดทดลองจะถูกวางบนพื้นผิวเอียงเพื่อให้มีวงกบ
________________
* ข้อความในเอกสารตรงกับต้นฉบับ - หมายเหตุของผู้ผลิตฐานข้อมูล

3.2.16. วันพุธ ลี:

พื้นฐานของสื่อ - เปปโตน 10.0 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 50 ซม. 3, แลคโตส 5.0 กรัม, แคลเซียมคาร์บอเนต 3.0 กรัม, ฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1, NaHPO 0.5 กรัม, วุ้น 18 กรัมวางในขวดวัดปริมาตร ที่มีความจุ 1 dm3 เติมน้ำกลั่นจนถึงเครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำ และตั้งค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (7.0 ± 1) สื่อถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา 20 นาที และหากจำเป็น ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C ไม่เกิน 30 วัน

ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ ให้เติมสารละลายบรอมครีโซลสีม่วงที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 20 ซม. ที่มีความเข้มข้นมวล 1 กรัม/ลบ.ม. ลงในสารละลายเบส 1 เดซิเมตร ผสมและเทลงในจานเลี้ยงเชื้อ สื่อถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) °C ไม่เกิน 7 วัน

3.3. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์นมหมัก การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

3.3.1. การเตรียมนมไฮโดรไลซ์

นมพร่องมันเนยจากธรรมชาติหรือที่ทำขึ้นใหม่จะต้มหรือบำบัดด้วยไอน้ำเป็นเวลา 20 นาที และทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ (45 ± 2) °C นำค่าความเป็นกรดที่ใช้งานไปสู่ค่า pH (7.7±0.1) โดยการเติมสารละลายที่มีน้ำเป็นส่วนประกอบด้วย NaOH 40% ผงตับอ่อนตั้งแต่ 0.5 ถึง 1.0 กรัมเติมลงในนม 1,000 ซม. 3 จากนั้นเติมคลอโรฟอร์ม 5 ถึง 6 ซม. ลงในนม ปิดขวดด้วยจุกไม้ก๊อกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (40 ± 2) °C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ในช่วง 3-5 ชั่วโมงแรก จะมีการกวนนม 2-3 ครั้ง (หลังจากเปิดฝาขวดเล็กน้อย คนเพื่อขจัดคลอโรฟอร์ม)

จากนั้น นมไฮโดรไลซ์จะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษ เจือจางด้วยน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:1 ตั้งค่าความเป็นกรดที่ใช้งานเป็น pH (7.1 ± 0.1) โดยเติมสารละลายในน้ำที่มีเศษส่วนมวล NaOH 40% แล้วนำไปใช้ เพื่อเตรียมวุ้นกับนมไฮโดรไลซ์ ในกรณีของการเก็บรักษา นมที่ผ่านการไฮโดรไลซ์จะถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121±1) °C เป็นเวลา 15 นาที

3.3.2. การเตรียมวุ้นด้วยนมไฮโดรไลซ์

สารประกอบ:

เติมวุ้น 15 กรัมลงในนมไฮโดรไลซ์ 1,000 มล. อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกทำให้ร้อนจนกระทั่งวุ้นละลายหมดและกรองผ่านสำลี เทลงในหลอดทดลองหรือขวดแก้วและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา (10 ± 1) นาที

3.3.3. การเตรียมนมพร่องมันเนยปราศจากเชื้อ

นมพร่องมันเนยจากธรรมชาติหรือนมข้นจืดเทลงในหลอดทดลองขนาด 10 ซม. และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± 1) °C เป็นเวลา (10 ± 1) นาที

4. ดำเนินการทดสอบ

4.1. ดำเนินการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้น ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

4.1.1. สำหรับการตรวจหาเชื้อจุลินทรีย์จะใช้ตัวอย่างที่เตรียมไว้ของผลิตภัณฑ์หรือการเจือจางเริ่มต้น

ในการตรวจสอบการมีอยู่และการนับจำนวนของจุลินทรีย์ในจานเพาะเชื้อ ชุดของสารเจือจางจะถูกเตรียมจากตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหารหรือจากการเจือจางเริ่มต้นตามจำนวนจุลินทรีย์ที่อนุญาตซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับเฉพาะ ประเภทผลิตภัณฑ์อาหาร.

ในการคำนวณ NPs การเจือจางเริ่มต้นและชุดของการเจือจางสิบเท่าจะถูกเตรียมจากตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหารในลักษณะที่ตรวจไม่พบจุลินทรีย์ในพืชที่มีการเจือจางสูงสุด สำหรับการฉีดวัคซีนให้เลือกการเจือจางติดต่อกันอย่างน้อยสามครั้ง หลอดขนานสามหลอดได้รับการฉีดวัคซีนจากการเจือจางแต่ละครั้ง

4.1.2. สำหรับการเพาะเชื้อในอาหารเหลวโดยวิธี NVCh และบนจานเพาะเชื้อโดยวิธีลึก 1.0 ซม. 3 ของตัวอย่างผลิตภัณฑ์ที่เตรียมไว้และ (หรือ) เจือจาง สำหรับการเพาะเชื้อบนจานเพาะเชื้อโดยวิธีพื้นผิว - 0.1-0.2 ซม. 3 ต่อชิ้น

การหว่านด้วยวิธีลึกหรือพื้นผิวเช่นเดียวกับการใช้การกรองเมมเบรนดำเนินการตาม GOST 26670

เมื่อใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรน ปริมาตรของผลิตภัณฑ์ที่เป็นของเหลวจะถูกกรอง ซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับผลิตภัณฑ์อาหารบางประเภท

4.1.3. ในการระบุการมีอยู่หรือจำนวนของ NPs ของจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติค การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวอย่างใดอย่างหนึ่งตามที่ระบุไว้ในย่อหน้า 3.2.2, 3.2.6 หรือ 3.2.12

หากหลังจากเติมผลิตภัณฑ์ลงในสื่อ Blickfeldt แล้ว สื่อจะเปลี่ยนสี จากนั้นเติมสารละลายด่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อ (NaOH หรือ KOH) 2-3 หยดที่มีความเข้มข้นมวล 50 g/dm3 ลงไปจนกว่าสีเดิมจะกลับคืนมา

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติก แทนที่จะทำการเพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว อนุญาตให้ทำการเพาะเชื้อด้วยวิธีลึกเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งตามที่ระบุไว้ในย่อหน้าที่ 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7, 3.2.13 หรือ 3.2.14.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของ NPs ของแบคทีเรียในสกุล Lactobacillus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งตามที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.6 หรือ 3.2.12

ในการระบุการมีอยู่หรือนับจำนวนของแบคทีเรียสกุลแลคโตบาซิลลัส แทนที่จะฉีดวัคซีนในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว ให้ฉีดวัคซีนโดยวิธีลึกเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งตามที่ระบุไว้ในย่อหน้าที่ 3.2.7 หรือ 3.2.13

ในการระบุการมีอยู่ของแบคทีเรียประเภท Leuconostoc การฉีดวัคซีนจะดำเนินการบนอาหารเหลวที่ระบุไว้ในข้อ 3.2.4

ในการตรวจสอบการมีอยู่แทนการใช้สื่อที่เป็นของเหลว เช่นเดียวกับการนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Leuconostoc บนจานเพาะเชื้อหรือใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรน การเพาะเชื้อจะดำเนินการด้วยวิธีพื้นผิวบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในวรรค 3.2 .10.

ในการระบุการมีอยู่หรือนับจำนวนของสเตรปโตคอคคัสกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.11 และสำหรับเชื้อ S.thermophilus อาหารเลี้ยงเชื้อตามวรรค 3.2.16 ถูกนำมาใช้.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของแบคทีเรียสกุล Pediococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในข้อ 3.2.3

4.1.4. การฉีดวัคซีนเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือการนับจำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติก แบคทีเรียจำพวก Lactobacillus streptococci ของกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus ฟักตัวไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (30 ± 1) ° C หรือไม่เกิน 3 วันที่อุณหภูมิ (37 ± 1) ° C; การเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือการนับจำนวนของแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc จะถูกฟักเป็นเวลาไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (22±1) °C การเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของ S. thermophilus จะถูกบ่มเป็นเวลา 48 ± 3 ชั่วโมงที่ (45 ± 1) °C การเพาะเชื้อบนจานเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc จะถูกบ่มกลับหัว

การฟักตัวของพืชบนอาหารเหลวจะหยุดลงเมื่อสัญญาณการเจริญเติบโตปรากฏขึ้น

การนับโคโลนีเบื้องต้นบนอาหารเลี้ยงเชื้อจะดำเนินการหลังจาก 48 ชั่วโมง

4.1.5. ในการปลูกพืชบนอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของจุลินทรีย์กรดแลคติก, แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Pediococcus, Streptococci กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus, S.thermophilus การเข้าถึงถูกจำกัดตาม GOST 30425 หรือโดยหนึ่งใน วิธีการดังต่อไปนี้:

เทชั้นที่สองของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ละลายและทำให้เย็นลง (45 ± 1) °C ในปริมาณ 5.0 ซม. ลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่แข็งตัวในจานเลี้ยงเชื้อแล้วทิ้งไว้จนแข็งตัว

จานเพาะเชื้อวางในสภาพแวดล้อมที่เป็นก๊าซซึ่งประกอบด้วย 95% N และ 5% CO;

จานเพาะเชื้อวางอยู่ในเครื่องไร้อากาศ อุปกรณ์ปิดอยู่สร้างสุญญากาศ 86.6-93.3 kPa โดยใช้ปั๊มสุญญากาศ

พาราฟินเหลวที่ปราศจากเชื้อถูกเติมลงในหลอดทดลองแต่ละหลอดด้วยของเหลวในปริมาณที่จำเป็นเพื่อให้ได้คอลัมน์สูงประมาณ 2 ซม.

4.1.6. มีการตรวจสอบการเพาะเชื้อบนอาหารเหลวทุกวันและเลือกหลอดที่มีสัญญาณการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ ลักษณะของการเจริญของอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลวแสดงไว้ในภาคผนวก 2 จากหลอดทดลองที่มีสัญญาณของการเจริญเติบโต การเพาะเลี้ยงย่อยจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อ (ดูย่อหน้าที่ 4.1.3) ด้วยวงจรแบคทีเรียเพื่อให้ได้การเติบโตของโคโลนีที่แยกได้ พืชผลได้รับการบ่มตามข้อ 4.1.4

4.1.7. มีการดูพืชผลบนอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจากการบ่มและเลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับ ซึ่งมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะตั้งแต่ 15 ถึง 150 อาณานิคม

เมื่อกำหนดจำนวนของจุลินทรีย์โดยวิธีการกรองเมมเบรน อนุญาตให้เลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับหากมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะน้อยกว่า 15 กลุ่มที่เติบโตบนตัวกรอง

ลักษณะของโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะได้รับในภาคผนวก 2

4.1.8. เพื่อยืนยันว่าโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะเป็นของจุลินทรีย์กรดแลกติกหรือแบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Streptococci กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus, S.thermophilus อย่างน้อย 5 โคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะจากพืชตามข้อ 4.1.7 หรือ 4.1.6. การเป็นเจ้าของของแต่ละอาณานิคมที่เลือกของจุลินทรีย์บางชนิดนั้นถูกสร้างขึ้นโดยสัมพันธ์กับคราบแกรม, การเคลื่อนที่, การปรากฏตัวของ catalase, นอกจากนี้เมื่อระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostos จะมีการพิจารณาการปรากฏตัวของแคปซูลเมื่อระบุ Streptococci ของสายพันธุ์ S.thermophilus และกลุ่ม N streptococci ของสกุล Streptococcus การปรากฏตัวของการเจริญเติบโตในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มี NaCl 6.5%

4.1.8.1. ในการกำหนดอัตราส่วนของจุลินทรีย์ต่อคราบแกรมเตรียมรอยเปื้อนจากโคโลนีย้อมสีตาม GOST 30425 และกล้องจุลทรรศน์

4.1.8.2. เพื่อศึกษาการเคลื่อนที่ของจุลินทรีย์จากโคโลนี การเตรียมจะเตรียมโดยวิธีการแขวนหรือหยดแบบบดแล้วส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ผลลัพธ์ของกล้องจุลทรรศน์ได้รับการประเมินตามภาคผนวก 1

4.1.8.3. กิจกรรม catalase ของวัฒนธรรมถูกกำหนดตาม GOST 30425

ผลลัพธ์ของการกำหนดกิจกรรมของ catalase ได้รับการประเมินตามภาคผนวก 1

การสลายตัวของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในแบคทีเรียสกุล Pediococcus เป็นไปได้เนื่องจากเอนไซม์ pseudocatalase ดังนั้นเมื่อตรวจหาจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติกหรือแบคทีเรียในสกุล Pediococcus หากพบจุลินทรีย์แกรมบวกและเคลื่อนที่ไม่ได้ในโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ ทำให้เกิดปฏิกิริยา catalase ในเชิงบวก การขาดไซโตโครมจะถูกควบคุมโดยการตั้งค่าการทดสอบเบนซิดีน ในการทำเช่นนี้ อาณานิคมของแบคทีเรียอายุ 24-48 ชั่วโมงที่เติบโตบนจานเพาะเชื้อจะถูกเทด้วยสารละลายเบนซิดีนตามที่ระบุไว้ในข้อ 3.1.9 หลังจากที่สารละลายได้แช่โคโลนีแล้ว ให้เติมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 5% ในปริมาตรเท่ากันโดยประมาณลงในจาน จุลินทรีย์กรดแลคติกรวมถึงแบคทีเรียสกุล Pediococcus ไม่มีไซโตโครม เมื่อมีไซโตโครม โคโลนีจะย้อมสีเขียวอมฟ้าหรือสีน้ำเงินสด

ในกรณีที่ไม่มีเบนซิดีน อนุญาตให้ตรวจหาเอนไซม์ซูโดคาทาเลสบนอาหารเลี้ยงเชื้อตามข้อ 3.2.15 ที่มีความเข้มข้นของกลูโคสต่ำที่ 0.05%

พืชถูกบ่มตามข้อ 4.1.4 การตรวจหา pseudocatalase นั้นดำเนินการในลักษณะเดียวกับ catalase ตาม GOST 30425

เชื้อ Pseudocatalase ที่ผลิตได้อยู่ในสกุล Pediococcus

4.1.8.4. เมื่อทำการระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostoc จะมีการเตรียมการและย้อมสีตาม Buri เพื่อระบุแคปซูลของแบคทีเรีย ในการทำเช่นนี้ จะมีการผสมแบคทีเรียหนึ่งหยดบนสไลด์แก้วที่ละลายไขมันดีแล้วกับผงหมึกสีดำละเอียดหรือสารแขวนลอยของนิโกรซีน

ด้วยความช่วยเหลือของแก้วอีกใบที่มีขอบขัดมันจะมีการเตรียมรอยเปื้อนบาง ๆ อย่างรวดเร็วซึ่งจะแก้ไขได้โดยการส่งผ่านเปลวไฟของหัวเผาหลายครั้ง รอยเปื้อนนั้นถูกย้อมด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเลตหรือสารละลายคาร์โบลฟุคซิน ล้างอย่างระมัดระวังในภาชนะที่มีน้ำ ปล่อยให้อากาศแห้งและส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ไม่อนุญาตให้ทำให้รอยเปื้อนระหว่างแผ่นกระดาษกรองแห้ง พื้นหลังของการเตรียมถูกย้อมด้วยหมึกสีดำหรือนิโกรซีนบาง ๆ ร่างกายของแบคทีเรียถูกย้อมด้วยสีเดียว แคปซูลยังคงไม่มีการย้อมสี

4.1.8.5. เมื่อระบุกลุ่ม N streptococci ของสกุล Streptococcus, streptococci ของสายพันธุ์ S.thermophilus จะไม่มีการเจริญเติบโตในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่มีปริมาณโซเดียมคลอไรด์ 6.5%

สำหรับสิ่งนี้ วัฒนธรรมตามข้อ 4.1.8 จะถูกย่อยบนสื่อที่ระบุไว้ในข้อ 3.2.8 และ 3.2.9

การเพาะเชื้อจะถูกบ่มที่ (30±1) °С เป็นเวลา 3 วัน และเมื่อตรวจพบ S.thermophilus การฉีดวัคซีนจะถูกบ่มที่ (45±1) °С เป็นเวลา 3 วัน

4.2. การทดสอบผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

4.2.1. การเตรียมการเจือจางผลิตภัณฑ์นมหมัก (แห้งและของเหลว) ตาม GOST 9225

เพื่อเตรียมการเจือจางของเชื้อเริ่มต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรียและการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก ขอบของขวดและบรรจุภัณฑ์ถูกเช็ดด้วยแอลกอฮอล์ ขอบของขวดถูกเผาและเอาจุกออก ตัดขอบของบรรจุภัณฑ์ ใช้กรรไกรพ่นไฟ ชั่งวัสดุทดสอบ 1 กรัมลงในมอร์ตาร์ปลอดเชื้อหรือเผาไฟ ปิดฝาด้วยจานเพาะเชื้อหรือกระดาษปลอดเชื้อ บดให้ละเอียดโดยเติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์จำนวนเล็กน้อยจากขวดที่มี สารละลายหรือบัฟเฟอร์ 99 มล. สารแขวนลอยจะถูกเทลงในขวดที่มีสารละลายโซเดียมคลอไรด์หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่เหลืออยู่และได้รับการเจือจางครั้งที่สองที่ 1:100

จากการเจือจางครั้งที่สองของผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก การเจือจางต่อไปนี้จะถูกเตรียมตามจำนวนของแบคทีเรียกรดแลคติกที่ระบุในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิค โดยใช้ตารางที่ 1

ตารางที่ 1

4.2.2. การหว่านเพื่อนับจำนวนของแลคติคแอซิดสเตรปโตคอคคัสนั้นดำเนินการในวุ้นหรือสารอาหารเหลวที่เตรียมตามวรรค 3.3.2 และ 3.3.3 และการหว่านเพื่อนับจำนวนแบคทีเรียกรดแลกติก - ในอาหารเหลวที่เตรียมตาม ด้วยวรรค 3.3.3

สำหรับการเพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้น จะมีการเลือกใช้การเจือจางเหล่านั้น เมื่อทำการเพาะเชื้อบนจาน จะมีโคโลนีเติบโตจาก 15 ถึง 150 โคโลนี

จากแต่ละตัวอย่าง การฉีดวัคซีนทำตาม GOST 9225 1 ซม. ของการเจือจางที่สอดคล้องกันของผลิตภัณฑ์ (ดูตารางที่ 1) บนจานเลี้ยงเชื้อ

เมื่อหว่านในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลวจากการเจือจางสามหรือสี่ครั้งล่าสุด (ดูตารางที่ 1) ให้เติม 1 ซม. ของการเจือจางแต่ละครั้งลงในหลอดทดลองคู่ขนานกับนมไขมันต่ำที่ปราศจากเชื้อ

4.2.3. หลอดทดลองหรือจานเพาะเชื้อที่มีการเพาะเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทและบ่มที่อุณหภูมิ (30 ± 1) °C เพื่อนับแบคทีเรียกรดแลคติคชนิดมีโซฟิลิก ที่อุณหภูมิ (40 ± 1) °C เพื่อนับแบคทีเรียกรดแลคติคที่ชอบความร้อนและ ที่ (32 ± 1) °C สำหรับการแจกแจงร่วมกันของแบคทีเรียกรดแลกติกประเภทเมโซฟิลิกและเทอร์โมฟิลิก เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 72 ชั่วโมง

5. การประมวลผลผลลัพธ์

5.1. การประมวลผลผลการวิเคราะห์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก เชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น การเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

5.1.1. ผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์อาหารจะได้รับการประเมินสำหรับแต่ละตัวอย่างแยกกัน

5.1.2. เมื่อศึกษาคุณสมบัติทางวัฒนธรรม สัณฐานวิทยา และชีวเคมีในการพิจารณา:

จุลินทรีย์ที่สร้างกรดแลคติคพบ gram-positive, immobile, catalase-negative rods หรือ non-forming-spore-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative หรือ pseudo-catalase-forming cocci แล้วสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นกรดแลกติก

พบแบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, ไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, เคลื่อนที่ไม่ได้, catalase-negative จากนั้นจึงสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นของสกุล Lactobacillus

แบคทีเรียในสกุล Leuconostoc, ไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, เคลื่อนที่ไม่ได้, catalase-negative cocci ล้อมรอบด้วยแคปซูล จากนั้นจึงสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นของสกุล Leuconostoc;

แบคทีเรียสกุล Streptococcus group N, non-forming-spore-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative, cocci ที่ไม่เจริญในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และ 6.5% NaCl จึงสรุปว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบเป็นของ สกุล Streptococcus กลุ่ม N;

แบคทีเรียสกุล Pediococcus พบ non-spore-forming, gram-positive, immobile, catalase-positive (หรือ catalase-positive แต่ให้ผลลบ benzidine test) หรือ pseudo-catalase-positive cocci แล้วสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบเป็นของ สกุล Pediococcus;

แบคทีเรียชนิด S.thermophilus, non-forming-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative, thermophilic cocci ที่ไม่เจริญในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และพบ NaCl 6.5% จึงสรุปว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบ อยู่ในสายพันธุ์ Streptococcus thermophilus

5.1.3. หากการยืนยันลักษณะโคโลนี ใน 80% ของกรณี นั่นคือ อย่างน้อย 4 ใน 5 โคโลนี มีการยืนยันการเติบโตของกลุ่มหรือสกุลของจุลินทรีย์บางกลุ่ม ก็จะถือว่าโคโลนีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่เติบโตบน จานอยู่ในกลุ่มสกุลหรือสปีชีส์นี้ ในกรณีอื่นๆ จำนวนของจุลินทรีย์จะถูกกำหนดตามเปอร์เซ็นต์ของโคโลนีที่ยืนยันต่อจำนวนโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่นำมาเพื่อยืนยัน

5.1.4. เมื่อกำหนด MPN หรือเมื่อฉีดวัคซีนผลิตภัณฑ์บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลว หลอดจะถือว่าเป็นผลบวก หากในระหว่างการเพาะเลี้ยงย่อยในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ตามมาและการยืนยันโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ จุลินทรีย์ของกลุ่ม สกุล หรือสปีชีส์ที่กำหนดพบในโคโลนีลักษณะเฉพาะอย่างน้อยหนึ่งโคโลนี

5.1.5. จำนวนจุลินทรีย์ที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ถูกกำหนดโดยจำนวนหลอดทดสอบที่เป็นบวกตาม GOST 30425

หากการเจือจาง 10 เท่าที่เลือกสำหรับการฉีดวัคซีนมีค่าสูงกว่า เช่น 10, 10 และ 10 ค่า MPN แบบตารางจะคูณด้วยผลต่างระหว่างการเจือจางที่เลือกและการเจือจาง 10 เท่าแบบตาราง นั่นคือ 100

หากการเจือจาง 10 เท่าที่เลือกสำหรับการฉีดวัคซีนมีค่าต่ำกว่า เช่น 10 (1 กรัม), 10, 10 ค่า MPN แบบตารางจะถูกหารด้วยความแตกต่างระหว่างการเจือจางที่เลือกและการเจือจางแบบตาราง 10 เท่า นั่นคือ 10

5.1.6. ผลลัพธ์ของการกำหนดจำนวนจุลินทรีย์โดยการเพาะเชื้อในจานเพาะเชื้อหรือโดยวิธี NVCh หรือการใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรนจะถูกคำนวณใหม่ต่อ 1 กรัมหรือ 1 ซม. 3 ของผลิตภัณฑ์และบันทึกตามข้อกำหนดของ GOST 26670

5.1.7. ผลลัพธ์ของการพิจารณาการมีอยู่ของจุลินทรีย์ในตัวอย่างเฉพาะของผลิตภัณฑ์แสดงไว้ดังนี้ จุลินทรีย์กรดแลคติก (หากจำเป็น ให้ระบุสกุลหรือชนิด) พบหรือไม่พบในตัวอย่างผลิตภัณฑ์

5.2. ประมวลผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

5.2.1. ด้วยการพัฒนาของแบคทีเรียกรดแลคติคในนมเหลวขนาดกลาง นมจะจับตัวเป็นก้อน

ในการคำนวณจำนวนแบคทีเรียกรดแลคติกทั้งหมด (สเตรปโทคอกคัสและแบคทีเรียชนิดแท่ง) ให้สังเกตการเจือจาง 3 ครั้งหลังสุดของนมที่ทำให้นมเปรี้ยว

สร้างตัวเลข ประกอบด้วยตัวเลขสามหลักที่ระบุการเจือจางสามครั้งสุดท้าย ตัวเลขตัวแรกของลักษณะตัวเลขสอดคล้องกับการเจือจางที่นมจับตัวเป็นก้อนในหลอดทดลองสองหลอด ตัวเลขต่อไปนี้ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวในการเจือจางสองครั้งถัดไป

ตามลักษณะเชิงตัวเลขในตารางที่ 2 พบจำนวนจุลินทรีย์กรดแลกติกที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด ซึ่งคูณด้วยการเจือจางซึ่งหลักแรกของลักษณะเชิงตัวเลขเริ่มต้นขึ้น

ตารางที่ 2

ตารางไม่รวมชุดค่าผสมที่ยอมรับไม่ได้

จำนวนผลลัพธ์สอดคล้องกับจำนวนเซลล์แบคทีเรียกรดแลคติกใน 1 กรัมหรือ 1 ซม. ของผลิตภัณฑ์

ตัวอย่างการคำนวณจำนวนจุลินทรีย์ที่เป็นไปได้มากที่สุดในกรณีของการติดเชื้อของหลอดทดลองคู่ขนานสองหลอดแสดงไว้ในภาคผนวก 3

หากจำเป็นต้องกำหนดจำนวนของ Streptococci และแท่งที่แตกต่างกันจากนั้นจากหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวให้เตรียมด้วยกล้องจุลทรรศน์ตาม GOST 9225 ดูที่หลอดทดลองที่มีแท่งและแยกจากกัน สเตรปโตค็อกคัส.

การนับจำนวนสเตรปโตคอกคัสกรดแลคติกหรือแท่งนั้นดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

5.2.2. การนับจำนวนโคโลนีของแบคทีเรียกรดแลคติกที่เติบโตบนอาหารเลี้ยงเชื้อและคำนวณเนื้อหาใหม่ใน 1 กรัมหรือ 1 ซม. ของผลิตภัณฑ์นั้นดำเนินการตาม GOST 9225

ภาคผนวก 1 (ข้อมูล) ลักษณะของจุลินทรีย์

เอกสารแนบ 1
อ้างอิง

ภาคผนวก 2 (ข้อมูล) ลักษณะเฉพาะของโคโลนีของจุลินทรีย์ในแลคติกบนตัววุ้นและลักษณะการเจริญเติบโตบนอาหารเหลว

ภาคผนวก 2
อ้างอิง

ภาคผนวก 3 (ข้อมูล) ตัวอย่างการคำนวณจำนวนแบคทีเรียแลคติกที่เป็นไปได้มากที่สุดโดยใช้วิธีแบ่งอย่างจำกัด

ภาคผนวก 3
อ้างอิง

สร้างตัวเลข ประกอบด้วยตัวเลขสามหลักที่ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมพร่องมันเนยในการเจือจาง 3 ครั้งล่าสุด ตัวเลขตัวแรก (ด้านซ้าย) ของลักษณะตัวเลขคือ 2 (ขดหลอดทดลอง 2 หลอดที่เจือจางด้วยอัตราส่วน 1:100) ตัวที่สองคือ 1 และตัวที่สามคือ 1

ดังนั้นลักษณะตัวเลขจะเป็น 211 ตามตารางที่ 2 จะตรงกับหมายเลข 13.0 ตัวเลขนี้ต้องคูณด้วยการลดสัดส่วนที่ตัวเลขตัวแรกของคุณลักษณะตัวเลขเริ่มต้นขึ้น (ในตัวอย่าง การเจือจางนี้คือ 1:100)

ดังนั้น 1 cm3 มีแบคทีเรียกรดแลคติค 1300 ตัว (13.0x100=1300)

คูณด้วยการเจือจางเราจะได้จำนวน Streptococci ใน 1 ซม. - 7000, แท่ง - 250

ข้อความอิเล็กทรอนิกส์ของเอกสาร
จัดทำโดย Kodeks JSC และตรวจสอบกับ:
สิ่งพิมพ์อย่างเป็นทางการ
ผลิตภัณฑ์อาหาร อาหารกระป๋อง
วิธีวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา:
นั่ง. GOST - ม.: Standartinform, 2010

GOST 10444.11-89

มาตรฐานระหว่างรัฐ

ผลิตภัณฑ์อาหาร

วิธีการตรวจหาจุลินทรีย์ในแลคติก

ฉบับอย่างเป็นทางการ

ข้อมูลมาตรฐาน

UDC 663/.665.3.001.4:006.354

อินเตอร์สเตต

กลุ่ม H09

มาตรฐาน

ผลิตภัณฑ์อาหาร วิธีการตรวจสอบจุลินทรีย์กรดแลคติค

ผลิตภัณฑ์อาหาร. วิธีการตรวจสอบแบคทีเรียกรดแลคติค

MKS 07.100.30 OKSTU 9109

วันที่แนะนำ 01.01.91

มาตรฐานนี้ใช้กับอาหารและผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก และกำหนดวิธีการสำหรับการตรวจหาจุลินทรีย์กรดแลคติกที่มีชีวิตและจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) รวมถึงวิธีการกำหนดในผลิตภัณฑ์อาหาร ( ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลกติก) แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Leuconostoc, group N streptococci ของจีนัส Streptococcus, Pediococcus, S. thermophilus และการหาจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ของแบคทีเรียสกุลแลคโตบาซิลลัส

วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการเพาะผลิตภัณฑ์จำนวนหนึ่งและ (หรือ) การเจือจางในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกของเหลวหรือวุ้น การปลูกพืชภายใต้สภาวะที่เหมาะสม และหากจำเป็น ให้พิจารณาคุณสมบัติทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของจุลินทรีย์ที่ตรวจพบและนับจำนวนพวกมัน

วิธีการนี้มีไว้สำหรับ:

การสร้างความสอดคล้องตามตัวบ่งชี้ทางจุลชีววิทยาของคุณภาพของอาหารและผลิตภัณฑ์นมเปรี้ยว การเพาะเลี้ยงเริ่มต้น ความเข้มข้นของแบคทีเรียและการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติกตามข้อกำหนดของเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิค

การทำให้ปลอดเชื้อทางอุตสาหกรรมของอาหารกระป๋อง

ระบุสาเหตุของความบกพร่องของอาหาร

1. การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมการ

1.1. การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหาร ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก ตามมาตรฐาน GOST 26668, 26669

การสุ่มตัวอย่างผลิตภัณฑ์นมหมัก (แบบแห้งและแบบเหลว) การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติค และการเตรียมสำหรับการวิเคราะห์ - ตามมาตรฐาน GOST 9225* *

1.2. อาหารกระป๋องได้รับการตรวจสอบความรัดกุม - ตาม GOST 8756.18

อาหารกระป๋องเต็มรูปแบบ ลักษณะปกติ ถูกควบคุมอุณหภูมิก่อนการทดสอบที่อุณหภูมิ 30-37 ° C ในภาชนะที่มีความจุสูงถึง 1 dm 3 รวมเป็นเวลาอย่างน้อย 5 วัน ในภาชนะที่มีความจุมากกว่า 1 dm 3 - เป็นเวลาอย่างน้อย 7 วัน

ผลิตภัณฑ์อาหารที่จำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติคถูกทำให้เป็นมาตรฐานจะไม่อยู่ภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ

การเจือจางผลิตภัณฑ์จัดทำขึ้นในสารละลายเกลือเปปโตนตาม GOST 26669

การเจือจางครั้งแรกของผลิตภัณฑ์ที่มี NaCl มากกว่า 5% เตรียมโดยใช้น้ำเปปโตน การเจือจางเบื้องต้นของปลาและผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์เตรียมโดยใช้น้ำเกลือ

* ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย ใช้ GOST R 53430-2009

สิ่งพิมพ์อย่างเป็นทางการห้ามพิมพ์ซ้ำ

© Standards Publishing House, 1989 © STANDARTINFORM, 2010

2. อุปกรณ์ วัสดุ และน้ำยา

ในการดำเนินการทดสอบ อุปกรณ์ วัสดุ รีเอเจนต์จะใช้ตาม GOST 10444.1, GOST 9225 และสิ่งต่อไปนี้:

เครื่องชั่งสำหรับห้องปฏิบัติการเอนกประสงค์ที่มีคุณสมบัติทางมาตรวิทยาตามมาตรฐาน GOST 24104* โดยมีขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 กรัม และขีดจำกัดข้อผิดพลาดที่ ± 2 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักรีเอเจนต์)

เครื่องชั่งสำหรับห้องปฏิบัติการเอนกประสงค์ที่มีคุณสมบัติทางมาตรวิทยาตามมาตรฐาน GOST 24104 * โดยมีขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 กรัม และขีดจำกัดข้อผิดพลาด ± 15 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักผลิตภัณฑ์)

กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงชีวภาพพร้อมอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสหรือยี่ห้ออื่นที่คล้ายคลึงกัน ครอบแว่นตาตาม GOST 6672; สไลด์แก้วตาม GOST 9284;

เทอร์โมสตัทที่มีช่วงอุณหภูมิในการทำงาน 28-55 °С ซึ่งช่วยให้รักษาอุณหภูมิที่ตั้งไว้โดยมีข้อผิดพลาด ± 1 °С จุกไม้ก๊อกตาม GOST 5541;

แว่นขยายกระเป๋าพับให้กำลังขยาย 4-10 เท่าตาม GOST 25706 ตับอ่อนสำหรับการเตรียมแบคทีเรียและไวรัส คลอโรฟอร์มทางเทคนิคตาม GOST 20015;

นมพร่องมันเนยที่มีความเป็นกรดไม่เกิน 19°T ที่ได้จากนมวัวที่เก็บเกี่ยวไม่ต่ำกว่าเกรด 2 ตาม GOST 13264 ** หรือนมผงพร่องมันเนยตาม GOST 10970 ***; แอล-อาร์จินีน ไฮโดรคลอไรด์; เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก โพแทสเซียมซิเตรต คาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส; แฝด-80; โซเดียมอะซิเตต แอมโมเนียมซิเตรต

แมกนีเซียมซัลเฟต (MgS0 4 7H 2 0);

แมงกานีสซัลเฟต (MnS0 4 2H 2 0);

แมงกานีสซัลเฟต (MnS0 4 4H 2 0);

กรดซอร์บิก

นิโกรซีน;

3. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

3.1. การเตรียมสารละลายรีเอเจนต์และอินดิเคเตอร์สำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

3.1.1. ตัวบ่งชี้ Bromocresol สีม่วงซึ่งเป็นสารละลายที่มีความเข้มข้นมวล 1 g / dm 3: 0.1 กรัมของ bromocresol สีม่วงตามกฎของ asepsis จะถูกถ่ายโอนล้างด้วยน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3 ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมายด้วยน้ำเดียวกัน สารละลายจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.2. แคลเซียมคาร์บอเนต ซึ่งเป็นสารแขวนลอยในน้ำที่มีมวลความเข้มข้น 30 g/dm 3: 3 g ของแคลเซียมคาร์บอเนต ฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1 จะถูกถ่ายโอน ล้างด้วยน้ำกลั่น ลงในภาชนะวัดที่มีความจุ 100 cm 3 ระดับเสียงถูกปรับไปที่เครื่องหมาย สารแขวนลอยถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121+1) °C เป็นเวลา 20 นาที การระงับจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.3. คาร์โบล ฟุคซิน, สารละลายเข้มข้น: ฟูคซิน 1 กรัมผสมกับเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 10 ซม. 3 และสารละลายฟีนอล 100 ซม. 3 ที่มีมวลความเข้มข้น 50 กรัม/เดซิเมตร 3

ในการเตรียมสารละลายคาร์โบลิกฟูซิน น้ำกลั่น 90 ซม. 3 จะถูกเติมลงในสารละลายเข้มข้นของคาร์โบลฟูซิน 10 ซม. 3

3.1.4. สารละลายคริสตัลไวโอเลตที่มีมวลเข้มข้น 10 g/dm 3: 1 กรัมของผลึกไวโอเล็ตจะถูกถ่ายโอน ล้างด้วยน้ำกลั่น ลงในภาชนะวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 cm 3 ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย สารละลายจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

* ตั้งแต่วันที่ 1 กรกฎาคม 2545 GOST 24104-2001 มีผลบังคับใช้ GOST R 53228-2008 มีผลบังคับใช้ในดินแดนของสหพันธรัฐรัสเซีย

** ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย ใช้ GOST R 52054-2003

*** ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย ใช้ GOST R 52791-2007

3.1.5. สารแขวนลอยไนโกรซีนที่มีความเข้มข้นของมวล 100 g / dm 3: 10 g ของนิโกรซีนจะถูกถ่ายโอน, ล้างออกด้วยน้ำกลั่น, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3, ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย, ให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 45-50 ° C ในอ่างน้ำจากนั้นกรองผ่านตัวกรองผ้าฝ้าย

3.1.6. สารละลายเกลือเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.7. น้ำเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.8. กรดซอร์บิก, สารละลายอัลคาไลน์: โอนกรดซอร์บิก 1 กรัม, ล้างด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ที่มี NaOH = 1 โมล / เดซิเมตร 3, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3, ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมายด้วย วิธีแก้ปัญหาเดียวกัน สารละลายที่ได้จะถูกฆ่าเชื้อโดยการกรองเมมเบรนตามมาตรฐาน GOST 26670

อนุญาตให้เตรียมสารละลายกรดซอร์บิกโดยไม่ต้องกรองตามกฎของ asepsis ในขณะที่เตรียมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

3.1.9. รีเอเจนต์สำหรับการตรวจหาไซโตโครม: เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก 1 กรัมละลายในกรดกลาเซียลอะซิติก 99.8% 20 ซม. 3 เติมน้ำกลั่น 30 ซม. 3 และทำให้ร้อนช้าๆ หลังจากเย็นลง 50 ซม. 3 ของเอทิล 96% เติมแอลกอฮอล์ลงในสารละลาย วิธีการแก้ปัญหาจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลา 1 เดือน

3.1.10. สารละลายทางสรีรวิทยาจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลกติก)

3.2.1. สื่อความหนาแน่นของ Blikfeldt จัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.2. สื่อของ Blickfeldt เป็นของเหลว: แลคโตส 10 กรัม, กลูโคส 10 กรัม, เปปโตน 5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 950 ซม. 3 ต้มและกรองผ่านตัวกรองกระดาษ เติมยีสต์สกัด 20 ซม. 32 ซม. สารละลายบรอมครีซอลสีม่วง 32 ซม. 32 ซม. ลงในเครื่องกรอง 3.1.1 ปรับค่า pH เป็น 7.3 + 0.1 เทลงในหลอดทดลองที่ปลอดเชื้อแล้วฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (117 ± 1) °C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.3. Medium Briggs แก้ไขโดย Sharp:

ในน้ำกลั่น 875 ซม. 3 เติมเปปโทน 15 กรัม กลูโคส 20 กรัม ยีสต์สกัด 25 ซม. 3 โซเดียมอะซิเตต 5 กรัม โพแทสเซียมฟอสเฟต 5 กรัม แอมโมเนียมซิเตรต 2 กรัม น้ำมะเขือเทศ 100 ซม. 3 (จากข้อเท็จจริงที่ว่าในน้ำผลไม้มีของแข็งที่ละลายน้ำได้อย่างน้อย 4.5% หากน้ำมะเขือเทศมีปริมาณของแข็งต่างกัน น้ำมะเขือเทศจะถูกแปลงเป็นของแข็ง 4.5%) ทวีน 1 ซม. 3 - 80.5 ซม. 3 ของ สารละลายเกลือ (MgS0 4 7H 2 0 - 11.5 ก., MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 ก., FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 ก., น้ำกลั่นสูงถึง 100 ซม. 3), วุ้น 15 ก.

ต้มส่วนผสมด้วยไฟอ่อนจนวุ้นละลายหมด ปรับค่า pH ให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.5 + 0.1) สื่อถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (115+1) °C เป็นเวลา 15 นาที

3.2.4. ยีสต์ขนาดกลาง: ในสารสกัดจากยีสต์ 100 ซม. 3 ที่เตรียมตาม GOST 10444.1 เติมน้ำกลั่น 900 ซม. 3 แคลเซียมคาร์บอเนต 10 กรัมฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1 และซูโครส 100 กรัม ส่วนผสมได้รับความร้อนจนกระทั่งซูโครสละลาย ค่า pH จะถูกปรับเพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (7.1 ± 0.1) เทลงในหลอดทดลองขนาด 10 ซม. 3 และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) ° C เป็นเวลา 15 นาที

3.2.5. วุ้นกะหล่ำปลีจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.6. สื่อ MPC เหลว: เปปโตน 10 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 20 ซม. 3, กลูโคส 20.0 กรัม, ทวีน 1.0 ซม. 3 - 80, โพแทสเซียมฟอสเฟต 2.0 กรัม, โซเดียมอะซิเตต 5 0.0 กรัม, ไตรแอมโมเนียมซิเตรต 2.0 กรัม, 0.2 กรัม กรัมของแมกนีเซียมซัลเฟต 0.05 กรัมของแมงกานีสซัลเฟต (MnSO 4 4H 2 0) เติมน้ำเนื้อลงในเครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำและปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 ° C (6.2 + 0.1) เทสื่อขนาด 10 ซม. 3 ลงในหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) ° C เป็นเวลา 15 นาที หลอดทดลองที่มีสารอาหารจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 + 1) ° C ไม่เกิน 30 วัน

3.2.7. อาหารเลี้ยงเชื้อ MPC จัดทำขึ้นตามสูตรที่ระบุในและ 3.2.6 ด้วยการเติมวุ้น 15-18 กรัม หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) °C เป็นเวลา 15 นาที สื่อที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4+1) °C ไม่เกิน 30 วัน

หากจำเป็น เพื่อเพิ่มความสามารถในการเลือก หลังจากการฆ่าเชื้อ ให้เติมสารละลายด่างของกรดซอร์บิก 1 ซม. 3 หลังจากการฆ่าเชื้อเป็น 1 dm 3 ของวุ้นหรืออาหารเหลว 3.1.8.

3.2.8. น้ำซุปเปปโตนเนื้อปานกลาง pH 9.6:

ในน้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่เตรียมตาม GOST 10444.1 ค่า pH จะถูกปรับโดยใช้สารละลายอัลคาไลและกรดตาม GOST 10444.1 ดังนั้นหลังจากการฆ่าเชื้อแล้วจะอยู่ที่ 9.6 ที่ 25 ° C สื่อถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121+1) °C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.9. น้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 6.5% จัดทำขึ้นตาม GOST

10444.1 แต่เมื่อเตรียม ให้เพิ่มปริมาณโซเดียมคลอไรด์ที่เติมเป็น 65 กรัมต่อ 1 เดซิเมตร 3 ของตัวกลาง

3.2.10. สารอาหารวุ้นที่มีน้ำตาลซูโครส:

ซูโครส 100.0 กรัม, วุ้น 15.0 กรัมเติมลงในน้ำซุปเนื้อเปปโตน 1 dm 3, คนเป็นครั้งคราว, ส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนจนเดือดและละลายส่วนประกอบทั้งหมดอย่างสมบูรณ์

สื่อถูกทำให้เย็นลงที่ 45-55 °C และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (7.1 + 0.1)

เทสื่อลงในขวดและฆ่าเชื้อเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ (121 + 1) °C หลังจากการฆ่าเชื้อและตรวจสอบค่า pH แล้ว อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกผสมให้เข้ากันและเทลงในจานเพาะเชื้อ เก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 + 1) °C ไม่เกิน 14 วัน

3.2.11. Wednesday Reddy: พื้นฐานของสิ่งแวดล้อม - ในขวดที่มีน้ำกลั่น 500 ซม. 3 เติมวุ้น 15.0 กรัมและอุ่นในอ่างน้ำจนวุ้นละลาย ในอีกขวดที่มีน้ำกลั่น 500 ซม. 3 เติมโพแทสเซียมซิเตรต 10.0 กรัมและคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส 15.0 กรัมแล้วละลายด้วยความร้อน เนื้อหาของขวดทั้งสองผสมกันและเปปโทน 3.0 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม. 3 โพแทสเซียมฟอสเฟตไดเบสิก 1.25 กรัม เติมแอล-อาร์จินีนไฮโดรคลอไรด์ 5.0 กรัม อุ่นในอ่างน้ำจนส่วนประกอบละลายหมด เย็นลง ที่อุณหภูมิ 45-55 °C และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.3 ± 0.2) พื้นฐานของสื่อจะถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121+1) °C เป็นเวลา 15 นาที และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4+1) °C ไม่เกิน 30 วัน

ในการเตรียมสารอาหารให้เพิ่มนมพร่องมันเนย 5.0 ซม. 3, แคลเซียมคาร์บอเนตแขวนลอย 100 ซม. 3 ที่มีความเข้มข้นมวล 30 กรัม / ลบ.ม. 3 และ 2 ซม. 3 ของสารละลายบรอมครีซอลสีม่วงที่มีความเข้มข้นของมวล 1 dm 3 ของฐานละลายและเย็นลงถึง 45-55 ° C 1 g / dm 3

3.2.12. สื่อของธูปฤาษีเป็นของเหลว: เปปโตน 10.0 กรัมวางในขวดวัดปริมาตรที่มีความจุ 1.0 dm 3

สารสกัดจากยีสต์ 25.0 cm 3, กลูโคส 20.0 g, 1.0 cm 3 tween - 80, 6.0 g โพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนแทนที่, 2.0 g แอมโมเนียมซิเตรต, 25.0 g โซเดียมอะซิเตต, 1.32 cm 3 glazial acetic acid, 0.575 g ของแมกนีเซียมซัลเฟต, 0.12 g ของแมงกานีส ซัลเฟต (MnSO 4 2H 2 0), 0.034 กรัมของธาตุเหล็กซัลเฟต เติมน้ำกลั่นที่เครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบด้วยความร้อนในอ่างน้ำ และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °С (5.4+0.1) . เทสื่อขนาด 10 ซม. 3 ลงในหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) ° C เป็นเวลา 15 นาที หลอดทดลองที่มีสารอาหารจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 + 1) ° C ไม่เกิน 30 วัน

3.2.13. อาหารเลี้ยงเชื้อ Rogosa จัดทำขึ้นตามสูตรที่อธิบายไว้ในและ 3.2.12 ด้วยการเพิ่มเติม

วุ้น 20.0 กรัม หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) °C เป็นเวลา 15 นาที สื่อที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4+1) °C ไม่เกิน 30 วัน

3.2.14. น้ำมะเขือเทศจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.15. สื่อสำหรับการตรวจหา pseudocatalase: ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 1 dm 3 สถานที่

5.0 เปปโตน, สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม. 3, ทวีน 0.5 ซม. 3 - 80, 0.1 ก. (MnS0 4 4H 2 0), น้ำตาลกลูโคส 0.5 ก., วุ้น 15 ก. เติมน้ำซุปเปปโตนเนื้อลงในเครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในน้ำ อาบน้ำและปรับ pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 °C (6.9 + 0.1) เทสื่อลงในหลอดทดลองขนาด 5-7 ซม. 3 และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (121 + 1) ° C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากการฆ่าเชื้อ หลอดทดลองจะถูกวางบนพื้นผิวเอียงเพื่อให้มีวงกบ

3.2.16. วันพุธ ลี:

พื้นฐานของสื่อ - เปปโตน 10.0 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 50 ซม. 3, แลคโตส 5.0 กรัม, แคลเซียมคาร์บอเนต 3.0 กรัม, ฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1, 0.5 กรัมของ Na 2 HP0 4 วางในขวดวัดปริมาตรด้วย ความจุ 1 dm 3 วุ้น 18 กรัม เติมน้ำกลั่นที่เครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำ และตั้งค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25°C (7.0±1) อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121+1)°C เป็นเวลา 20 นาที และถ้าจำเป็น ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4+1)°C ไม่เกิน 30 วัน

ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อให้เติมสารละลาย bromcresol สีม่วง 20 ซม. 3 ที่มีความเข้มข้น 1 กรัมต่อเดซิเมตร 3 ลงในเบส 1 เดซิเมตร ผสมและเทลงในจานเลี้ยงเชื้อ สื่อถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4+1) °C ไม่เกิน 7 วัน

3.3. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์นมหมัก การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

3.3.1. การเตรียมนมไฮโดรไลซ์

นมพร่องมันเนยจากธรรมชาติหรือที่ทำขึ้นใหม่จะต้มหรือบำบัดด้วยไอน้ำเป็นเวลา 20 นาที และทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ (45 + 2) °C นำค่าความเป็นกรดที่ใช้งานไปสู่ค่า pH (7.7+0.1) โดยการเติมสารละลายที่เป็นน้ำที่มีเศษส่วนโดยมวลของ NaOH 40% ผงตับอ่อนตั้งแต่ 0.5 ถึง 1.0 กรัมเติมลงในนม 1,000 ซม. 3 จากนั้นเติมคลอโรฟอร์ม 5 ถึง 6 ซม. 3 ลงในนม ปิดขวดด้วยจุกไม้ก๊อกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (40 + 2) °C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ในช่วง 3-5 ชั่วโมงแรก นมจะถูกกวน 2-3 ครั้ง (หลังจากเปิดฝาขวดเล็กน้อย คนเพื่อขจัดคลอโรฟอร์ม)

จากนั้นนมไฮโดรไลซ์จะถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เจือจางด้วยน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:1 ตั้งค่าความเป็นกรดที่ใช้งานเป็น pH (7.1 + 0.1) โดยเติมสารละลายน้ำที่มีเศษส่วนมวล NaOH 40% แล้วใช้ เพื่อเตรียมวุ้นกับนมไฮโดรไลซ์ ในกรณีของการเก็บรักษา นมไฮโดรไลซ์จะถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) °C เป็นเวลา 15 นาที

3.3.2. การเตรียมวุ้นด้วยนมไฮโดรไลซ์

นมไฮโดรไลซ์ ซม. 3 - 1,000;

วุ้น, กรัม - 15.

ถึง 1,000 ซม. 3 ของนมไฮโดรไลซ์เติมวุ้น 15 กรัม อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกทำให้ร้อนจนวุ้นละลายหมดและกรองผ่านสำลี เทลงในหลอดทดลองหรือขวดและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (121 + 1) °C เป็นเวลา (10 + 1) นาที

3.3.3. การเตรียมนมพร่องมันเนยปราศจากเชื้อ

นมพร่องมันเนยธรรมชาติหรือนมข้นจืดเทลงในหลอดทดลอง 10 ซม. 3 และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 + 1) ° C เป็นเวลา (10 + 1) นาที

4. ดำเนินการทดสอบ

4.1. ดำเนินการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้น ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

4.1.1. สำหรับการตรวจหาเชื้อจุลินทรีย์จะใช้ตัวอย่างที่เตรียมไว้ของผลิตภัณฑ์หรือการเจือจางเริ่มต้น

ในการตรวจสอบการมีอยู่และการนับจำนวนของจุลินทรีย์ในจานเพาะเชื้อ ชุดของสารเจือจางจะถูกเตรียมจากตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหารหรือจากการเจือจางเริ่มต้นตามจำนวนจุลินทรีย์ที่อนุญาตซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับเฉพาะ ประเภทผลิตภัณฑ์อาหาร.

ในการคำนวณ NPs การเจือจางเริ่มต้นและชุดของการเจือจางสิบเท่าจะถูกเตรียมจากตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหารในลักษณะที่ตรวจไม่พบจุลินทรีย์ในพืชที่มีการเจือจางสูงสุด สำหรับการฉีดวัคซีนให้เลือกการเจือจางติดต่อกันอย่างน้อยสามครั้ง หลอดขนานสามหลอดได้รับการฉีดวัคซีนจากการเจือจางแต่ละครั้ง

4.1.2. สำหรับการเพาะเชื้อในอาหารเหลวโดยวิธี NVCh และบนจานเพาะเชื้อโดยวิธีลึก 1.0 ซม. 3 ของตัวอย่างผลิตภัณฑ์ที่เตรียมไว้และ (หรือ) เจือจาง สำหรับการเพาะเชื้อบนจานเพาะเชื้อโดยวิธีพื้นผิว - 0.1-0.2 ซม. 3 แต่ละ.

การหว่านด้วยวิธีลึกหรือพื้นผิวเช่นเดียวกับการใช้การกรองเมมเบรนดำเนินการตาม GOST 26670

เมื่อใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรน ปริมาตรของผลิตภัณฑ์ที่เป็นของเหลวจะถูกกรอง ซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับผลิตภัณฑ์อาหารบางประเภท

4.1.3. ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของ NPs ของจุลินทรีย์กรดแลคติก การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งที่ระบุไว้ในย่อหน้า 3.2.2, 3.2.6 หรือ 3.2.12

หากหลังจากเติมผลิตภัณฑ์ลงในสื่อ Blickfeldt แล้ว สื่อจะเปลี่ยนสี จากนั้นเติมสารละลายด่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อ (NaOH หรือ KOH) 2-3 หยดที่มีความเข้มข้นมวล 50 g/dm 3 ลงไปจนกว่าสีเดิมจะกลับคืนมา .

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติก แทนที่จะทำการเพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว อนุญาตให้ทำการเพาะเชื้อด้วยวิธีลึกเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งตามที่ระบุไว้ในย่อหน้าที่ 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7, 3.2.13 หรือ 3.2.14.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของแบคทีเรีย NPB ของสกุล Lactobacillus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเหลวที่ระบุไว้ในย่อหน้า 3.2.6 หรือ 3.2.12

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียในสกุลแลคโตบาซิลลัส แทนที่จะฉีดวัคซีนในอาหารเหลว การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีเชิงลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งที่ระบุไว้ในย่อหน้า 3.2.7 หรือ 3.2.13

ในการตรวจสอบการมีอยู่ของแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc การฉีดวัคซีนจะดำเนินการบนอาหารเหลวที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.4

ในการตรวจสอบการมีอยู่แทนการใช้สื่อที่เป็นของเหลว เช่นเดียวกับการนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Leuconostoc บนจานเพาะเชื้อหรือใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรน การเพาะเชื้อจะดำเนินการด้วยวิธีพื้นผิวบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในวรรค 3.2 .10.

ในการระบุการมีอยู่หรือนับจำนวนของสเตรปโตคอคคัสกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.11 และสำหรับเชื้อ S.thermophilus อาหารเลี้ยงเชื้อตามวรรค 3.2.16 ถูกนำมาใช้.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Pediococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นตามที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.3

4.1.4. การฉีดวัคซีนเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือการนับจำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติก แบคทีเรียจำพวก Lactobacillus streptococci ของกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus ฟักตัวไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (30 + 1) ° C หรือไม่เกิน 3 วันที่อุณหภูมิ (37 + 1) ° C; วัฒนธรรมเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือการนับจำนวนแบคทีเรียประเภท Leuconostoc นั้นฟักตัวไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (22 + 1) ° C การเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของ S.thermophilus จะถูกบ่มเป็นเวลา (48+3) ชั่วโมงที่ (45+1)°C การเพาะเชื้อบนจานเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc จะถูกบ่มกลับหัว

การฟักตัวของเชื้อบนอาหารเหลวจะหยุดลงเมื่อสัญญาณที่มองเห็นได้ปรากฏขึ้น

การนับโคโลนีเบื้องต้นบนอาหารเลี้ยงเชื้อจะดำเนินการหลังจาก 48 ชั่วโมง

4.1.5. ในการปลูกพืชบนอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของจุลินทรีย์กรดแลคติก, แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Pediococcus, Streptococci กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus, S.thermophilus การเข้าถึงถูกจำกัดตาม GOST 30425 หรือโดยหนึ่งใน วิธีการดังต่อไปนี้:

บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่แข็งตัวในจานเพาะเชื้อ เทชั้นที่สองของอาหารเลี้ยงเชื้อที่หลอมเหลวและทำให้เย็นถึง (45+1) °C อาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นในปริมาณ 5.0 ซม. 3 แล้วทิ้งไว้จนแข็งตัว

จานเพาะเชื้อวางอยู่ในสภาพแวดล้อมที่เป็นก๊าซซึ่งประกอบด้วย 95% N 2 และ 5% CO 2 ;

จานเพาะเชื้อวางอยู่ในเครื่องไร้อากาศ อุปกรณ์ปิดอยู่สร้างสุญญากาศ 86.6-93.3 kPa โดยใช้ปั๊มสุญญากาศ

พาราฟินเหลวที่ปราศจากเชื้อถูกเติมลงในหลอดทดลองแต่ละหลอดด้วยของเหลวในปริมาณที่จำเป็นเพื่อให้ได้คอลัมน์สูงประมาณ 2 ซม.

4.1.6. มีการตรวจสอบการเพาะเชื้อบนอาหารเหลวทุกวันและเลือกหลอดที่มีสัญญาณการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ ลักษณะของการเจริญของอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลวแสดงไว้ในภาคผนวก 2 จากหลอดทดลองที่มีสัญญาณของการเจริญเติบโต การเพาะเลี้ยงย่อยจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อ (ดูย่อหน้าที่ 4.1.3) ด้วยวงจรแบคทีเรียเพื่อให้ได้การเติบโตของโคโลนีที่แยกได้ พืชผลได้รับการบ่มตามข้อ 4.1.4

4.1.7. มีการดูพืชผลบนอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจากการบ่มและเลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับ ซึ่งมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะตั้งแต่ 15 ถึง 150 อาณานิคม

เมื่อกำหนดจำนวนของจุลินทรีย์โดยวิธีการกรองเมมเบรน อนุญาตให้เลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับหากมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะน้อยกว่า 15 กลุ่มที่เติบโตบนตัวกรอง

ลักษณะของโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะได้รับในภาคผนวก 2

4.1.8. เพื่อยืนยันว่าโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะเป็นของจุลินทรีย์กรดแลกติกหรือแบคทีเรียในจำพวก Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, streptococci ของกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus, S.thermophilus อย่างน้อย 5 โคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะถูกเลือกจากพืชตามวรรค 4.1 7 หรือ 4.1.6 การเป็นของแต่ละอาณานิคมที่เลือกของจุลินทรีย์บางชนิดนั้นถูกสร้างขึ้นโดยสัมพันธ์กับคราบแกรม, การเคลื่อนที่, การปรากฏตัวของ catalase, นอกจากนี้เมื่อระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostos จะมีการพิจารณาการปรากฏตัวของแคปซูลเมื่อระบุ streptococci

สายพันธุ์คอฟ S.thermophilus และกลุ่ม N streptococci ของสกุล Streptococcus - การปรากฏตัวของการเจริญเติบโตในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มี NaCl 6.5%

4.1.8.1. ในการกำหนดอัตราส่วนของจุลินทรีย์ต่อคราบแกรมเตรียมรอยเปื้อนจากโคโลนีย้อมสีตาม GOST 30425 และกล้องจุลทรรศน์

4.1.8.2. เพื่อศึกษาการเคลื่อนที่ของจุลินทรีย์จากโคโลนี การเตรียมจะเตรียมโดยวิธีการแขวนหรือหยดแบบบดแล้วส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ผลลัพธ์ของกล้องจุลทรรศน์ได้รับการประเมินตามภาคผนวก 1

4.1.8.3. กิจกรรม catalase ของวัฒนธรรมถูกกำหนดตาม GOST 30425

ผลลัพธ์ของการกำหนดกิจกรรมของ catalase ได้รับการประเมินตามภาคผนวก 1

การสลายตัวของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในแบคทีเรียสกุล Pediococcus เป็นไปได้เนื่องจากเอนไซม์ pseudocatalase ดังนั้นเมื่อตรวจหาจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติกหรือแบคทีเรียในสกุล Pediococcus หากพบจุลินทรีย์แกรมบวกและเคลื่อนที่ไม่ได้ในโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ ทำให้เกิดปฏิกิริยา catalase ในเชิงบวก การขาดไซโตโครมจะถูกควบคุมโดยการตั้งค่าการทดสอบเบนซิดีน ในการทำเช่นนี้ อาณานิคมของแบคทีเรียอายุ 24-48 ชั่วโมงที่เติบโตบนจานเพาะเชื้อจะถูกเทด้วยสารละลายเบนซิดีนที่ระบุไว้ใน และ 3.1.9. หลังจากที่สารละลายได้แช่โคโลนีแล้ว ให้เติมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 5% ในปริมาตรเท่ากันโดยประมาณลงในจาน จุลินทรีย์กรดแลคติกรวมถึงแบคทีเรียสกุล Pediococcus ไม่มีไซโตโครม เมื่อมีไซโตโครม โคโลนีจะย้อมสีเขียวอมฟ้าหรือสีน้ำเงินสด

ในกรณีที่ไม่มี benzidine จะได้รับอนุญาตให้ตรวจหา pseudocatalase บนตัวกลางและ 3.2.15 ที่มีความเข้มข้นของกลูโคสต่ำ - 0.05%

พืชถูกบ่มสำหรับและ 4.1.4 การตรวจหา pseudocatalase นั้นดำเนินการในลักษณะเดียวกับ catalase ตาม GOST 30425

เชื้อ Pseudocatalase ที่ผลิตได้อยู่ในสกุล Pediococcus

4.1.8.4. เมื่อทำการระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostoc จะมีการเตรียมการและย้อมสีตาม Buri เพื่อระบุแคปซูลของแบคทีเรีย ในการทำเช่นนี้ จะมีการผสมแบคทีเรียหนึ่งหยดบนสไลด์แก้วที่ละลายไขมันดีแล้วกับผงหมึกสีดำละเอียดหรือสารแขวนลอยของนิโกรซีน

ด้วยความช่วยเหลือของแก้วอีกใบที่มีขอบขัดมันจะมีการเตรียมรอยเปื้อนบาง ๆ อย่างรวดเร็วซึ่งจะแก้ไขได้โดยการส่งผ่านเปลวไฟของหัวเผาหลายครั้ง รอยเปื้อนนั้นถูกย้อมด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเลตหรือสารละลายคาร์โบลฟุคซิน ล้างอย่างระมัดระวังในภาชนะที่มีน้ำ ปล่อยให้อากาศแห้งและส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ไม่อนุญาตให้ทำให้รอยเปื้อนระหว่างแผ่นกระดาษกรองแห้ง พื้นหลังของการเตรียมถูกย้อมด้วยหมึกสีดำหรือนิโกรซีนบาง ๆ ร่างกายของแบคทีเรียถูกย้อมด้วยสีเดียว แคปซูลยังคงไม่มีการย้อมสี

4.1.8.5. เมื่อระบุกลุ่ม N streptococci ของสกุล Streptococcus, streptococci ของสายพันธุ์ S. thermophilus จะไม่มีการเจริญเติบโตในน้ำซุปเปปโตนเนื้อที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่มีปริมาณโซเดียมคลอไรด์ 6.5%

สำหรับวัฒนธรรมนี้ตามและ. 4.1.8 วัฒนธรรมย่อยบนสื่อที่ระบุใน pi 3.2.8 และ 3.2.9

พืชผลจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ (30 + 1) °C เป็นเวลา 3 วัน และเมื่อมีการระบุ

เพาะเลี้ยงเชื้อ S. thermophilus ที่ (45+1) °C เป็นเวลา 3 วัน

4.2. การทดสอบผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

4.2.1. การเตรียมการเจือจางผลิตภัณฑ์นมหมัก (แห้งและของเหลว) ตาม GOST 9225

เพื่อเตรียมการเจือจางของเชื้อเริ่มต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรียและการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก ขอบของขวดและบรรจุภัณฑ์ถูกเช็ดด้วยแอลกอฮอล์ ขอบของขวดถูกเผาและเอาจุกออก ตัดขอบของบรรจุภัณฑ์ ใช้กรรไกรพ่นไฟ ชั่งวัสดุทดสอบ 1 กรัมลงในมอร์ตาร์ปลอดเชื้อหรือเผาไฟ ปิดฝาด้วยจานเพาะเชื้อหรือกระดาษปลอดเชื้อ บดให้ละเอียดโดยเติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์จำนวนเล็กน้อยจากขวดที่มี สารละลายหรือบัฟเฟอร์ 99 ซม. 3 สารแขวนลอยจะถูกเทลงในขวดที่มีสารละลายโซเดียมคลอไรด์หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่เหลืออยู่และได้รับการเจือจางครั้งที่สองที่ 1: 100

และการเจือจางครั้งที่สองของผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติคจะเตรียมการเจือจางต่อไปนี้ตามจำนวนของแบคทีเรียกรดแลคติกที่ระบุในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคโดยใช้ตาราง หนึ่ง.

ตารางที่ 1

4.2.2. การหว่านเพื่อนับจำนวนของสเตรปโตคอกคัสกรดแลกติกนั้นดำเนินการในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นหรือสารอาหารเหลวที่เตรียมตาม pi 3.3.2 และ 3.3.3 และการหว่านเพื่อนับจำนวนแท่งกรดแลคติก - ในอาหารเหลวที่จัดทำขึ้นตามวรรค 3.3.3

สำหรับการเพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้น จะมีการเลือกใช้การเจือจางเหล่านั้น เมื่อทำการเพาะเชื้อบนจาน จะมีโคโลนีเติบโตจาก 15 ถึง 150 โคโลนี

จากแต่ละตัวอย่าง การฉีดวัคซีนทำตาม GOST 9225 1 ซม. 3 ของการเจือจางที่สอดคล้องกันของผลิตภัณฑ์ (ดูตารางที่ 1) บนจานเลี้ยงเชื้อ

เมื่อหว่านในอาหารเหลวจากการเจือจางสามหรือสี่ครั้งล่าสุด (ดูตารางที่ 1) ให้เติม 1 ซม. 3 ของการเจือจางแต่ละครั้งลงในหลอดทดลองคู่ขนานกับนมขาดมันเนยที่ปราศจากเชื้อ

4.2.3. หลอดทดลองหรือจานเพาะเชื้อที่มีการเพาะเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทและบ่มที่อุณหภูมิ (30+1) °C เพื่อนับแบคทีเรียกรดแลกติกชนิดมีโซฟิลิก ที่อุณหภูมิ (40+1) °C เพื่อนับแบคทีเรียกรดแลคติกชนิดเทอร์โมฟิลิกและ ที่ (32+1) °C สำหรับการแจกแจงร่วมกันของแบคทีเรียกรดแลกติกประเภทเมโซฟิลิกและเทอร์โมฟิลิก เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 72 ชั่วโมง

5. การประมวลผลผลลัพธ์

5.1. การประมวลผลผลการวิเคราะห์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก เชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น การเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

5.1.1. ผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์อาหารจะได้รับการประเมินสำหรับแต่ละตัวอย่างแยกกัน

5.1.2. เมื่อศึกษาคุณสมบัติทางวัฒนธรรม สัณฐานวิทยา และชีวเคมีในการพิจารณา:

จุลินทรีย์ที่สร้างกรดแลคติคพบ gram-positive, immobile, catalase-negative rods หรือ non-forming-spore-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative หรือ pseudo-catalase-forming cocci แล้วสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นกรดแลกติก

พบแบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, ไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, เคลื่อนที่ไม่ได้, catalase-negative จากนั้นจึงสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นของสกุล Lactobacillus

แบคทีเรียในสกุล Leuconostoc, ไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, เคลื่อนที่ไม่ได้, catalase-negative cocci ล้อมรอบด้วยแคปซูล จากนั้นจึงสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบนั้นเป็นของสกุล Leuconostoc;

แบคทีเรียสกุล Streptococcus group N, non-forming-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative, cocci ที่ไม่เจริญในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และ 6.5% NaCl แล้วให้ข้อสรุปว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบเป็นของ สกุล Streptococcus กลุ่ม N;

แบคทีเรียสกุล Pediococcus พบ non-spore-forming, gram-positive, immobile, catalase-positive (หรือ catalase-positive แต่ให้ผลลบ benzidine test) หรือ pseudo-catalase-positive cocci แล้วสรุปได้ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบเป็นของ สกุล Pediococcus;

แบคทีเรียชนิด S.thermophilus, non-forming-forming, gram-positive, immobile, catalase-negative, thermophilic cocci ที่ไม่เจริญในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และพบ NaCl 6.5% จึงสรุปว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบ อยู่ในสายพันธุ์ Streptococcus thermophilus

5.1.3. หากการยืนยันลักษณะโคโลนี ใน 80% ของกรณี นั่นคือ อย่างน้อย 4 ใน 5 โคโลนี มีการยืนยันการเติบโตของกลุ่มหรือสกุลของจุลินทรีย์บางกลุ่ม ก็จะถือว่าโคโลนีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่เติบโตบน จานอยู่ในกลุ่มสกุลหรือสปีชีส์นี้ ในกรณีอื่นๆ จำนวนของจุลินทรีย์จะถูกกำหนดตามเปอร์เซ็นต์ของโคโลนีที่ยืนยันต่อจำนวนโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่นำมาเพื่อยืนยัน

5.1.4. เมื่อกำหนด MPN หรือเมื่อฉีดวัคซีนผลิตภัณฑ์บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลว หลอดจะถือว่าเป็นผลบวก หากในระหว่างการเพาะเลี้ยงย่อยในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ตามมาและการยืนยันโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ จุลินทรีย์ของกลุ่ม สกุล หรือสปีชีส์ที่กำหนดพบในโคโลนีลักษณะเฉพาะอย่างน้อยหนึ่งโคโลนี

5.1.5. จำนวนจุลินทรีย์ที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ถูกกำหนดโดยจำนวนหลอดทดสอบที่เป็นบวกตาม GOST 30425

หากการเจือจาง 10 เท่าที่เลือกสำหรับการเพาะมีค่าสูงกว่า เช่น 10 _3, 10 -4 และ 10 -5 ค่า MPN แบบตารางจะถูกคูณด้วยผลต่างระหว่างการเจือจางแบบตารางที่เลือกและการเจือจาง 10 เท่า นั่นคือ โดย 100

หากการเจือจาง 10 เท่าที่เลือกสำหรับการฉีดวัคซีนมีค่าต่ำกว่า ตัวอย่างเช่น 10° (1 g), 10 -1 , 10 -2 ค่า MPN แบบตารางจะถูกหารด้วยความแตกต่างระหว่างการเจือจางที่เลือกและการเจือจาง 10 เท่าแบบตาราง นั่นคือ ภายในวันที่ 10

5.1.6. ผลลัพธ์ของการกำหนดจำนวนจุลินทรีย์โดยวิธีการเพาะเชื้อในจานเพาะเชื้อหรือโดยวิธี NVCh หรือการใช้วิธีการกรองเมมเบรนจะถูกคำนวณใหม่สำหรับผลิตภัณฑ์ 1 กรัมหรือ 1 ซม. 3 และบันทึกตามข้อกำหนดของ GOST 26670

5.1.7. ผลลัพธ์ของการพิจารณาการมีอยู่ของจุลินทรีย์ในตัวอย่างเฉพาะของผลิตภัณฑ์แสดงไว้ดังนี้ จุลินทรีย์กรดแลคติก (หากจำเป็น ให้ระบุสกุลหรือชนิด) พบหรือไม่พบในตัวอย่างผลิตภัณฑ์

5.2. ประมวลผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

5.2.1. ด้วยการพัฒนาของแบคทีเรียกรดแลคติคในนมเหลวขนาดกลาง นมจะจับตัวเป็นก้อน

ในการคำนวณจำนวนแบคทีเรียกรดแลคติกทั้งหมด (สเตรปโทคอกคัสและแบคทีเรียชนิดแท่ง) ให้สังเกตการเจือจาง 3 ครั้งหลังสุดของนมที่ทำให้นมเปรี้ยว

สร้างตัวเลข ประกอบด้วยตัวเลขสามหลักที่ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวในการเจือจางสามครั้งล่าสุด ตัวเลขตัวแรกของลักษณะตัวเลขสอดคล้องกับการเจือจางที่นมจับตัวเป็นก้อนในหลอดทดลองสองหลอด ตัวเลขต่อไปนี้ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวในการเจือจางสองครั้งถัดไป

ตามลักษณะตัวเลขตามตาราง. 2 ค้นหาจำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติกที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุดซึ่งคูณด้วยการเจือจางซึ่งตัวเลขตัวแรกของลักษณะตัวเลขเริ่มต้นขึ้น

ตารางที่ 2

ตารางไม่รวมชุดค่าผสมที่ยอมรับไม่ได้

จำนวนผลลัพธ์สอดคล้องกับจำนวนเซลล์แบคทีเรียกรดแลคติกใน 1 กรัมหรือ 1 ซม. 3 ของผลิตภัณฑ์

ตัวอย่างการคำนวณจำนวนจุลินทรีย์ที่เป็นไปได้มากที่สุดในกรณีของการติดเชื้อของหลอดทดลองคู่ขนานสองหลอดแสดงไว้ในภาคผนวก 3

หากจำเป็นต้องกำหนดจำนวน Streptococci และ Streptococci ที่แตกต่างกัน จากนั้นทำการทดสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่เตรียมด้วยกล้องจุลทรรศน์ตาม GOST 9225 และหลอดทดลองที่มีแท่งและ Streptococci จะถูกทำเครื่องหมายแยกกัน .

การนับจำนวนสเตรปโตคอกคัสกรดแลคติกหรือแท่งนั้นดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

5.2.2. การนับจำนวนโคโลนีของแบคทีเรียกรดแลกติกที่เติบโตบนอาหารเลี้ยงเชื้อและคำนวณเนื้อหาใหม่ใน 1 กรัมหรือ 1 ซม. 3 ของผลิตภัณฑ์นั้นดำเนินการตาม GOST 9225

ภาคผนวก 1 เอกสารอ้างอิง

ลักษณะของจุลินทรีย์

ชื่อจุลินทรีย์

ลักษณะ

จุลินทรีย์กรดแลคติก (ยกเว้นสกุล Sporolactobacillus ที่ระบุตาม GOST 30425)

แบคทีเรียสกุลแลคโตบาซิลลัส

แบคทีเรียที่สร้างเมือกในสกุล Leuconostoc

Streptococci กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus

แบคทีเรียสกุล Pediococcus

Streptococcus สายพันธุ์ S.thermophilus

แท่งที่ไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสลบหรือไม่สร้างสปอร์, แกรมบวก, ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสลบ, หรือ cocci ที่ก่อตัวเป็นซูโดคาตาเลส

แกรมบวก, ไม่สร้างสปอร์, แท่งสั้นหรือยาว, ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสเป็นลบ

แกรมบวก, ไม่สร้างสปอร์, ทรงกลมหรือรี, เรียงเป็นคู่หรือเป็นสายโซ่, ล้อมรอบด้วยแคปซูลที่ไม่เปื้อนแกรม, non-motile catalase-negative cocci

แกรมบวก, ไม่สร้างสปอร์, สายโซ่สั้นและยาว, ไม่เคลื่อนไหว, คาตาเลสลบ, ไม่เติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อ pH 9.6 และ 6.5% NaCl cocci

แกรมบวก, เป็นคู่หรือเป็นสายโซ่สั้นหรือยาว, ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสลบ, เทอร์โมฟิลิก, ไม่เติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อ pH 9.6 และ 6.5% NaCl cocci

ภาคผนวก 2 เอกสารอ้างอิง

ลักษณะเฉพาะของโคโลนีของจุลินทรีย์ในแลคติกบนตัววุ้นและลักษณะการเจริญเติบโตบนอาหารเหลว

ภาคผนวก 3 เอกสารอ้างอิง

ตัวอย่างการคำนวณจำนวนแบคทีเรียแลคติกที่เป็นไปได้มากที่สุด

วิธีการ จำกัด ดิวิชั่น

เจือจาง .............. 1: 10 1: 100 1: 1,000 1: 10,000

จำนวนหลอดเพาะเลี้ยง .......... 2 2 2 2

จำนวนหลอดทดลองที่ใส่นมเปรี้ยว2 2 1 1

สร้างตัวเลข ประกอบด้วยตัวเลขสามหลักที่ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมพร่องมันเนยในการเจือจาง 3 ครั้งล่าสุด หลักแรก (ทางซ้าย) ของลักษณะตัวเลขคือ 2 (ขดหลอดทดลอง 2 หลอดที่เจือจางด้วยอัตราส่วน 1:100) ตัวที่สองคือ 1 และตัวที่สามคือ 1

ดังนั้นลักษณะของตัวเลขจะเป็น 211 ซึ่งตรงกับตาราง 2 หมายเลข 13.0. ตัวเลขนี้ต้องคูณด้วยการลดสัดส่วนที่ตัวเลขตัวแรกของคุณลักษณะตัวเลขเริ่มต้นขึ้น (ในตัวอย่าง การเจือจางนี้คือ 1:100)

ดังนั้น 1 ซม. 3 มีแบคทีเรียกรดแลคติค 1300 ตัว (13.0x100 = 1300)

คูณด้วยการเจือจางเราจะได้จำนวน Streptococci ใน 1 ซม. 3 - 7000, แท่ง - 250

ข้อมูลข้อมูล

1. พัฒนาและแนะนำโดย State Agroprom ของสหภาพโซเวียต

2. ได้รับการอนุมัติและแนะนำโดยกฤษฎีกาของคณะกรรมการแห่งรัฐของสหภาพโซเวียตเพื่อการจัดการคุณภาพและมาตรฐานผลิตภัณฑ์ลงวันที่ 28 พฤศจิกายน 2532 หมายเลข 3502

3. แทนที่ GOST 10444.11-75

4. ข้อบังคับอ้างอิงและเอกสารทางเทคนิค

5. ระยะเวลาที่ใช้ได้ถูกลบออกตามโปรโตคอลหมายเลข 5-94 ของ Interstate Council for Standardization, Metrology and Certification (NUS 11-12-94)

6. สาธารณรัฐ เมษายน 2553

หน้า 1

หน้า 2

หน้า 3

หน้า 4

หน้า 5

หน้า 6

หน้า 7

หน้า 8

หน้า 9

หน้า 10

หน้า 11

หน้า 12

หน้า 13

หน้า 14

มาตรฐานระหว่างรัฐ

ผลิตภัณฑ์อาหาร

วิธีการตรวจหาจุลินทรีย์ในแลคติก

ฉบับอย่างเป็นทางการ

ข้อมูลมาตรฐาน

กลุ่ม H09

UDC 663/.665.3.001.4:006.354

อินเตอร์สเตต

มาตรฐาน

ผลิตภัณฑ์อาหาร วิธีการตรวจสอบจุลินทรีย์กรดแลคติค

ผลิตภัณฑ์อาหาร. วิธีการตรวจสอบแบคทีเรียกรดแลคติค

กอส

10444.11-89

MKS 07.100.30 OKSTU 9109

วันที่แนะนำ 01.01.91

มาตรฐานสากลนี้ใช้กับผลิตภัณฑ์เฉพาะและผลิตภัณฑ์นมหมัก การเพาะเลี้ยง ความเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก และกำหนดวิธีการสำหรับการพิจารณาจุลินทรีย์กรดแลคติกที่มีชีวิตและความบริสุทธิ์ที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPP) ตลอดจนวิธีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์เฉพาะกลุ่ม (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นม การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลกติก) แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Leuconostoc กลุ่ม N Streptococci Streptococcus เพดิโอค็อกคัส. S. thermophilus และการตรวจหาแบคทีเรียบริสุทธิ์ (MPP) ที่เป็นไปได้มากที่สุดของ Lactobacillus rol

Metol ขึ้นอยู่กับการหว่านผลิตภัณฑ์จำนวนหนึ่งและ (หรือ) การเจือจางในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลวหรือวุ้น การเพาะปลูกพืชภายใต้สภาวะที่เหมาะสม เป็นต้น หากจำเป็น ให้พิจารณาคุณสมบัติทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของจุลินทรีย์ที่ตรวจพบและนับจำนวน

วิธีการนี้มีไว้สำหรับ:

การปฏิบัติตามตัวบ่งชี้ทางจุลชีววิทยาของคุณภาพของอาหารและผลิตภัณฑ์จากมดลูก การเพาะเชื้อเริ่มต้น ความเข้มข้นของแบคทีเรียและการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติกตามข้อกำหนดของเอกสารข้อบังคับและทางเทคนิค

การจัดตั้งการฆ่าเชื้อทางอุตสาหกรรมของอาหารกระป๋อง:

ระบุสาเหตุของความบกพร่องของอาหาร

1. การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมการ

1.1. การเลือกและการเตรียมตัวอย่างผลิตภัณฑ์อาหาร ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมเปรี้ยว ตามมาตรฐาน GOST 26668 26669.

การสุ่มตัวอย่างผลิตภัณฑ์นมหมัก (แบบแห้งและแบบน้ำ) เชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก และการเตรียมสำหรับการวิเคราะห์ - ตาม GOST 9225 1 2

1.2. ตรวจสอบการรั่วไหลของอาหารกระป๋อง - ตาม GOST 8756.18

อาหารกระป๋องเต็มรูปแบบ ธรรมดาแต่มีลักษณะถูกควบคุมอุณหภูมิที่อุณหภูมิ 30-37 "C ก่อนทดสอบในภาชนะที่มีความจุไม่เกิน 1 dm 3 รวมเป็นเวลาอย่างน้อย 5 วัน ในกระป๋องที่มีความจุมากกว่า 1 dm 3 - อย่างน้อย 7 น้ำตาล

ผลิตภัณฑ์อาหารที่จำนวนจุลินทรีย์กรดแลคติคถูกทำให้เป็นมาตรฐานจะไม่อยู่ภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ

การเจือจางผลิตภัณฑ์จัดทำขึ้นในสารละลายเกลือเปปโตนตามมาตรฐาน GOST 26669

การเจือจางครั้งแรกของผลิตภัณฑ์ที่มีเศษส่วนมวลของ NaCI มากกว่า 5% เตรียมโดยใช้น้ำเปปโตน การเจือจางเบื้องต้นของปลาและผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์เตรียมโดยใช้น้ำเกลือ

GOST R 53430 - 2552

2. อุปกรณ์ วัสดุ และน้ำยา

สำหรับการทดสอบจะใช้อุปกรณ์ วัสดุ รีเอเจนต์ตาม GOST 10444.1 GOST 9225 และรายการต่อไปนี้:

เครื่องชั่งสำหรับใช้งานทั่วไปที่มีลักษณะทางมาตรวิทยาตามมาตรฐาน GOST 24104 3 . ด้วยขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 ก. และค่าความผิดพลาดสูงสุดที่อนุญาตคือ ±2 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักรีเอเจนต์):

เครื่องชั่งสำหรับใช้งานทั่วไปที่มีลักษณะทางมาตรวิทยาตาม GOST 24104 3 . ด้วยขีดจำกัดการชั่งน้ำหนักสูงสุดไม่เกิน 200 ก. และข้อผิดพลาดสูงสุดที่อนุญาตคือ ±15 มก. (สำหรับการชั่งน้ำหนักผลิตภัณฑ์)

กล้องจุลทรรศน์แสงชีวภาพพร้อมอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสหรือยี่ห้ออื่นที่คล้ายคลึงกัน: ครอบแว่นตาตาม GOST 6672; สไลด์แก้วตาม GOST 9284:

เทอร์โมสตัทที่มีช่วงอุณหภูมิในการทำงาน 28-55 3 C ช่วยให้คุณรักษาอุณหภูมิที่ตั้งไว้โดยมีข้อผิดพลาด± 1 'C จุกไม้ก๊อกตาม GOST 5541;

แว่นขยายแบบพับได้เพิ่มขึ้น 4-10 เท่าตาม GOST 25706 ตับอ่อนสำหรับการเตรียมแบคทีเรียและไวรัส: คลอโรฟอร์มทางเทคนิคตาม GOST 20015;

นมพร่องมันเนยที่มีความเป็นกรดไม่เกิน 19 "ต. ที่ได้จากนมวัวที่เก็บเกี่ยวไม่ต่ำกว่าเกรด 2 ตาม GOST 13264 4 หรือนมผงพร่องมันเนยตาม GOST 10970 5 L-arginine ไฮโดรคลอไรด์ เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก โพแทสเซียมซิเตรต: carboxyl silt i tse; half oct; tween-80; sodium acetate; ammonium citrate;

แมกนีเซียมซัลเฟต (MgS0 4 7H 2 0);

แมงกานีสซัลเฟต (MnS0 4 2H 2 0);

แมงกานีสซัลเฟต (MnS0 4 4H 2 0);

กรดซอร์บิก:

นิโกรซีน;

3. การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบ

3.1. การเตรียมสารละลายรีเอเจนต์และอินดิเคเตอร์สำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

3.1.1. ตัวบ่งชี้ Bromocresol สีม่วง, สารละลายที่มีความเข้มข้นมวล 1 g / dm 3: 0.1 กรัมของ bromocresol สีม่วงจะถูกถ่ายโอน, ล้างด้วยน้ำกลั่นที่ปราศจากเชื้อ, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3, ตามกฎของ asepsis และ ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมายด้วยน้ำเดียวกัน สารละลายจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.2. แคลเซียมคาร์บอเนต, สารแขวนลอยในน้ำที่มีมวลความเข้มข้น 30 g / dm 3: 3 g ของแคลเซียมคาร์บอเนต, presteril ที่แยกได้ตาม GOST 10444.1 ถ่ายโอน, ล้างด้วยน้ำกลั่น, ลงในภาชนะวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3, นำปริมาตรไปที่เครื่องหมาย. สารแขวนลอยถูกฆ่าเชื้อที่ (12111) 3 C เป็นเวลา 20 นาที การระงับจะถูกเก็บไว้ไม่เกิน 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.3. คาร์โบลฟุกซิน. สารละลายเข้มข้น: ฟูคซิน 1 กรัมผสมกับเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 10 ซม. 3 และสารละลายฟีนอล 100 ซม. 3 ที่มีมวลความเข้มข้น 50 กรัม/เดซิเมตร 3

ในการเตรียมสารละลายคาร์โบลิกฟุคซิน น้ำดิสปิลโพรเพน 90 ซม. 3 จะถูกเติมลงในสารละลายเข้มข้นของคาร์โบลฟุชซิน 10 ซม.

3.1.4. สารละลายคริสตัลไวโอเลตที่มีความเข้มข้นมวล 10 g / dm 3: 1 กรัมของคริสตัลไวโอเล็ตถูกถ่ายโอนล้างด้วยน้ำกลั่นลงในภาชนะวัดปริมาตร 100 ซม. ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย สารละลายถูกเก็บไว้นานกว่า 3 เดือนที่อุณหภูมิห้อง

3.1.5. สารแขวนลอยไนโกรซีนที่มีความเข้มข้นของมวล 100 g / dm ": นิโกรซีน 10 กรัมถูกถ่ายโอนล้างออกด้วยน้ำกลั่นลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3 ปริมาตรจะถูกปรับให้เป็นเครื่องหมาย ตัวกรอง

3.1.6. สารละลายเกลือเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.7. น้ำเปปโตนจัดทำขึ้นตาม GOST 26669

3.1.8. กรดซอร์บิก, สารละลายอัลคาไลน์: โอนกรดซอร์บิก 1 กรัม, ล้างด้วยสารละลายโซเดียมไพโรไซด์ที่มี NaOH = 1 โมล / เดซิเมตร 3, ลงในจานวัดปริมาตรที่มีความจุ 100 ซม. 3 ปริมาตรถูกปรับไปที่เครื่องหมายด้วยวิธีเดียวกัน สารละลายที่ได้จะถูกฆ่าเชื้อโดยการกรองเมมเบรนตามมาตรฐาน GOST 26670

อนุญาตให้เตรียมสารละลายกรดซอร์บิกโดยไม่ต้องกรองตามกฎของ asepsis ในกรณีนี้ สารละลายโซเดียมไพร็อกไซด์จะถูกเตรียมในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

3.1.9. รีเอเจนต์สำหรับการตรวจหาไซโตโครม: เบนซิดีนพื้นฐานหรือกรดไฮโดรคลอริก 1 กรัมละลายในกรดกลาเซียลอะซิติก 99.8% 20 ซม. 3 เติมน้ำกลั่น 30 ซม. 3 และทำให้ร้อนช้าๆ หลังจากเย็นลง 50 ซม. 3 ของเอทิล 96% เติมแอลกอฮอล์ลงในสารละลาย สารละลาย เก็บในตู้เย็นได้ 1 เดือน

3.1.10. สารละลายทางสรีรวิทยาจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์เฉพาะกลุ่ม (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก การเพาะเลี้ยงเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

3.2.1. สื่อความหนาแน่นของ Blnkfeldt จัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.2. วันพุธ "ของเหลว Blikfelyla: แลคโตส 10 กรัมละลายใน 950 ซม. 3 ของแผ่นน้ำ l-shrovanny กลูโคส 10 กรัม เปปโตน 5 กรัม ต้มและกรองผ่านกระดาษกรอง สารสกัดจากยีสต์ 20 ซม. 3 ถูกเติมลงในตัวกรอง สารละลายโบรมีนโครเอซัสสีม่วง 32 ซม. 3 ตามข้อ 3.1.1 ตั้งค่า pi 17.3±0.1 เทลงในหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (117 ± 1) * C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.3. Medium Briggs ดัดแปลงโดย Shari:

เติมเปปโทน 15 กรัมลงในน้ำกลั่น 875 ซม. 3 กลูโคส 20 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม. 3 โซเดียมอะซีเตต 5 ก. โพแทสเซียมฟอสเฟต 5 กรัมครั้งเดียว กรดแอมโมเนียมซิตริก 2 กรัม น้ำมะเขือเทศ 100 ซม. 3 (ตามข้อเท็จจริงที่ว่าน้ำผลไม้มีของแข็งที่ละลายน้ำได้อย่างน้อย 4.5% หากน้ำมะเขือเทศมีปริมาณของแข็งที่แตกต่างกัน ให้คำนวณใหม่เป็นปริมาณของแข็ง 4.5%) ความลึกลับ 1 ซม. 3 - 80.5 ซม. 3 สารละลายเกลือ (MgS0 4 7H; 0 -11.5 ก. MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 ก., FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 ก. น้ำกลั่นสูงถึง 100 ซม. 3), 15 g วุ้น

ต้มส่วนผสมด้วยไฟอ่อนจนวุ้นละลายหมด ปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25°C (6.510.1) สื่อถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (115 ± 1) *C เป็นเวลา 15 นาที

3.2.4. ยีสต์ขนาดกลาง: ในสารสกัดจากยีสต์ 100 ซม. 3 ที่เตรียมตาม GOST 10444.1 เติมน้ำกลั่น 900 ซม. 3 ฆ่าเชื้อ 10 กรัมตาม GOST 10444.1 แคลเซียมคาร์บอเนตและซูโครส 100 กรัม ส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนจนกระทั่งซูโครสละลาย ค่า pH จะถูกปรับด้วยวิธีนี้ เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 "C (7.1 ± 0.1) เทลงในหลอดทดลอง แต่ 10 ซม. 3 และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ< 121 ± 1) ‘С в течение 15 мин.

3.2.5. วุ้นกะหล่ำปลีจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.6. วันพุธ ของเหลว MRS: ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 1.0 dm 3 ใส่เปปโตน 10 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 20 ซม. 3. กลูโคส 20.0 กรัม, 1.0 ซม. 3 ทวีน - 80, โพแทสเซียมฟอสเฟต 2.0 กรัมถูกแทนที่ โซเดียมอะซิเตต 5.0 กรัม, ไตรแอมโมเนียมซิเตรต 2.0 กรัม, แมกนีเซียมซัลเฟต 0.2 กรัม, แมงกานีสซัลเฟต 0.05 กรัม (MnS0 4 4H 2 0) เพิ่มน้ำเนื้อเพื่อทำเครื่องหมาย; ละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำและปรับ pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 "C (6.210.1) สื่อถูกเทลงในหลอดทดลองที่ปราศจากเชื้อขนาด 10 ซม. 3 และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (12111) "C 15 นาที หลอดทดลองที่มีสารอาหารจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (411) 'C ไม่เกิน 30 วัน

3.2.7. MRS ขนาดกลางและสื่ออื่น ๆ จัดทำขึ้นตามสูตรที่ระบุในข้อ 3.2.6 ด้วยการเพิ่ม 15-18 loons หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (12111) "C เป็นเวลา 15 นาที สื่อสำเร็จรูปจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (411) * C ไม่เกิน 30 วัน .

หากจำเป็น เพื่อเพิ่มความสามารถในการเลือก หลังจากการฆ่าเชื้อ ให้เติมสารละลายด่างของกรดซอร์บิก 1 ซม. 3 แต่วุ้นหรืออาหารเหลว n ถึง 1 เดซิเมตร 3.1.8.

3.2.8. น้ำซุปเปปโตนเนื้อปานกลาง pH 9.6:

และน้ำซุปเพนโทนเนื้อสัตว์ที่จัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1 ตั้งค่า pH โดยใช้สารละลายอัลคาไลและกรดตาม GOST 10444.1 เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้อคือ 9.6 ที่ 25 "C สื่อจะถูกฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (121 ± I) * C เป็นเวลา 20 นาที

3.2.9. น้ำซุปเปปโตนเนื้อสัตว์ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 6.5% จัดทำขึ้นตาม GOST

10444.1 แต่เมื่อเตรียม ให้เพิ่มปริมาณโซเดียมคลอไรด์ที่เติมเป็น 65 กรัมต่อ 1 เดซิเมตร 3 ของตัวกลาง

3.2.10. สารอาหารวุ้นที่มีน้ำตาลซูโครส:

ซูโครส 100.0 กรัม, วุ้น 15.0 กรัมเติมลงในน้ำซุปเนื้อเนปโทน 1 dm 3 คนเป็นครั้งคราว ส่วนผสมถูกทำให้ร้อนจนเดือดและส่วนประกอบทั้งหมดละลายหมด

สื่อถูกทำให้เย็นลงที่ 45-55 "C และปรับ pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 * C (7.1 ± 0.1)

เทสื่อลงในขวดและฆ่าเชื้อเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ (121 ± 1) *C หลังจากการฆ่าเชื้อและตรวจสอบค่า pH แล้ว อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกผสมให้เข้ากันดีและเทลงในจานเลี้ยงเชื้อ โดยเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) * C เป็นเวลาไม่เกิน 14 ar

3.2.11. Wednesday Reddy: พื้นฐานของสิ่งแวดล้อม - ในขวดที่มีน้ำกลั่น 500 ซม. 3 เติมวุ้น 15.0 กรัมและอุ่นในอ่างน้ำจนวุ้นละลาย ในอีกขวดที่มีน้ำกลั่น 500 ซม. 3 เติมโพแทสเซียมซิเตรต 10.0 กรัมและคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส 15.0 กรัมแล้วละลายด้วยความร้อน ผสมเนื้อหาของขวดทั้งสองและเติมเปปโทน 3.0 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 25 ซม. 3 โพแทสเซียม 1.25 กรัม (1us<1юрнокнслого двузамешенною. 5.0 г L-аргинин гидрохлорида. нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45-55 "С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 "С (6.310.2). Основу среды стерилизуют при температуре < 121 ± 1) "С в течение 15 мин и хранят при температуре (4±1) *С не более 30 суг.

ในการเตรียมสารอาหารให้เติมนมพร่องมันเนย 5.0 ซม. 3 ลงใน 1 dm 3 ของฐานที่ละลายและทำให้เย็นลงถึง 45-55 "จาก g / dm 3

3.2.12. สื่อของธูปฤาษีเป็นของเหลว: เปปโตน 10.0 กรัมใส่ในขวดวัดปริมาตรที่มีความจุ 1.0 dm 3

25.0 ซม. 3 สารสกัดจากยีสต์. กลูโคส 20.0 กรัม ความลับ 1.0 ซม. 3 - โพแทสเซียมฟอสเฟต 80.6.0 กรัมครั้งเดียว, แอมโมเนียมซิเตรต 2.0 กรัม, โซเดียมอะซิเตต 25.0 กรัม 1.32 ซม. 3 กรดกลาเซียลอะซิติก 0.575 ก. แมกนีเซียมซัลเฟต แมงกานีสซัลเฟต 0.12 กรัม (MnS0 4 2GPO), เหล็กซัลเฟต 0.034 กรัม เติมน้ำกลั่นที่เครื่องหมาย ละลายส่วนประกอบโดยการระเหยในอ่างน้ำ และตั้งค่า pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 "C (5.410. 1) เทอาหารเลี้ยงเชื้อขนาด 10 ซม. 3 ในหลอดทดลองที่ปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (12111) * C เป็นเวลา 15 นาที หลอดทดลองที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (411) * C โดยไม่มี มากกว่า 30 วัน

3.2.13. สื่อและ Garizannoy ของ Rogosa จัดทำขึ้นตามสูตรที่อธิบายไว้ในและ 3.2.12. ด้วยการเพิ่ม

วุ้น 20.0 กรัม หลังจากละลายส่วนประกอบแล้ว สื่อจะถูกเทลงในขวดปลอดเชื้อและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (12111) 'C เป็นเวลา 15 นาที สื่อที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (411) 'C ไม่เกิน 30 อาร์ค

3.2.14. น้ำมะเขือเทศจัดทำขึ้นตาม GOST 10444.1

3.2.15. วันพุธสำหรับการตรวจหา pseudocatalase: ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 1 dm 3

5.0 เปปโทน 25 ซม. 3 ยีสต์สกัด. 0.5 ซม. 3 ทวีน - 80. 0.1 ก. (MnS0 4 4H>0) กลูโคส 0.5 กรัม เติมน้ำซุปเนื้อเจโทน 15 ก้อน ส่วนประกอบจะละลายโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำ และปรับค่า pH เพื่อให้หลังการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 * C (6.910.1) เทสื่อลงในหลอดทดลองขนาด 5-7 ซม. 3 และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (12111) * C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากการฆ่าเชื้อ หลอดทดลองจะถูกวางบนพื้นผิวเอียงเพื่อให้มีวงกบ

3.2.16. วันพุธ ลี:

พื้นฐานของสิ่งแวดล้อม - เปปโตน 10.0 กรัมจะถูกวางไว้ในขวดวัดปริมาตรที่มีความจุ I dm 3 50 ซม. 3 ยีสต์สกัด. แลคโตส 5.0 กรัม แคลเซียมคาร์บอเนต 3.0 กรัม ฆ่าเชื้อตาม GOST 10444.1, 0.5 กรัม Na 2 HP() 4 . วุ้น 18 กรัมเติมน้ำกลั่นที่เครื่องหมายละลายส่วนประกอบโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำและปรับค่า pH เพื่อให้หลังจากการฆ่าเชื้ออยู่ที่ 25 "C (7.011) สื่อถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (12111) * C เป็นเวลา 20 นาที และถ้าจำเป็น ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ (411) 'C ไม่เกิน 30 วัน

ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อให้เติมสารละลายโบรมีน-ครีซอลสีม่วง 20 ซม. 3 ที่มีความเข้มข้น 1 กรัมต่อเดซิเมตร 3 ลงในฐาน 1 เดซิเมตร ผสมและเทลงในจานเพาะเชื้อ สื่อถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4 ± 1) * C ไม่เกิน 7 วัน

3.3. การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการทดสอบผลิตภัณฑ์ cystic การเพาะเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

3.3.1. การเตรียมนมที่เป็นอัมพาต

นมพร่องมันเนยจากธรรมชาติหรือที่ทำขึ้นใหม่จะต้มหรือบำบัดด้วยไอน้ำเป็นเวลา 20 นาทีแล้วทำให้เย็นลง! ถึงอุณหภูมิ (45 ± 2) "C ความเป็นกรดที่ใช้งานจะถูกปรับเป็น pH (7.7 ± 0.1) โดยการเพิ่มสารละลายน้ำที่มีเศษส่วนของ NaOH 40% จาก 0.5 ถึง 1.0 กรัมของผงตับอ่อนจะถูกเพิ่มเป็น 1,000 ซม." ของนม จากนั้นเติมคลอโรฟอร์ม 5 ถึง 6 ซม. 3 ลงในนม ปิดขวดด้วยจุกไม้ก๊อกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ (4012) * C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง เพื่อกำจัดคลอโรฟอร์ม)

จากนั้น นมไฮโดรไลซ์จะถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เจือจางด้วยน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:1 ตั้งค่า pH ที่เป็นกรดที่ใช้งานอยู่ (7,110.1) โดยการเติมสารละลายน้ำที่มีสัดส่วนของ NaOH 40% และใช้ในการเตรียมวุ้นด้วยนมไฮโดรไลซ์ ในกรณีของการเก็บรักษา ไฮโดรไลซ์ต้นทุนต่ำจะถูกฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (121 ± 1) * C เป็นเวลา 15 นาที

3.3.2. การเตรียมวุ้นราชินีไฮโดรไลซ์

นมไฮโดรไลซ์ ซม. 3 - 1,000:

วุ้น, กรัม - 15.

ถึง 1,000 ซม. 3 กรัมของมดลูกที่เป็นอัมพาต เพิ่ม 15 ก้อน อาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกทำให้ร้อนจนกระทั่งวุ้นละลายหมดและกรองผ่านสำลี เทลงในหลอดทดลองหรือขวดและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ (12111) * C เป็นเวลา (1011) นาที

3.3.3. การเตรียมมดลูกที่ปราศจากไขมัน

ธัญพืชไขมันต่ำที่ปราศจากไขมันตามธรรมชาติหรือสร้างใหม่จะถูกใส่ในหลอดขนาด 10 ซม. 3 และฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ (12,111) °C เป็นเวลา (1,011) นาที

4. ดำเนินการทดสอบ

4.1. ดำเนินการทดสอบผลิตภัณฑ์อาหาร (ยกเว้น ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

4.1.1. สำหรับการตรวจหาเชื้อจุลินทรีย์จะใช้ตัวอย่างที่ย่อยแล้วของผลิตภัณฑ์หรือการเจือจางเริ่มต้น

ในการตรวจสอบการมีอยู่และนับจำนวนของจุลินทรีย์ในจานเพาะเชื้อ ชุดของสารเจือจางจะถูกเตรียมจากตัวอย่างผลิตภัณฑ์เฉพาะกลุ่มหรือจากการเจือจางเริ่มต้นตามจำนวนจุลินทรีย์ที่อนุญาตซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับเฉพาะ ประเภทของสินค้าเฉพาะกลุ่ม

ในการคำนวณ NPs จากตัวอย่างผลิตภัณฑ์เฉพาะ ให้เตรียมการเจือจางเริ่มต้นและชุดของการเจือจางสิบเท่าในลักษณะที่ตรวจไม่พบจุลินทรีย์ในพืชที่มีการเจือจางสูงสุด สำหรับการหว่านให้เลือกการเจือจางติดต่อกันอย่างน้อยสามครั้ง หลอดขนานสามหลอดได้รับการฉีดวัคซีนจากการเจือจางแต่ละครั้ง

4.1.2. D1I จะถูกหว่านในอาหารเหลวตามวิธี NVCh และ 1.0 ซม. ของตัวอย่างที่เตรียมไว้ของผลิตภัณฑ์และ (หรือ) การเจือจางของมันจะถูกนำไปใช้ในจานเพาะเชื้อโดยวิธีลึกสำหรับการหว่านบนจานเพาะเชื้อโดยวิธีพื้นผิว - 0.1 - 0.2 ซม. 3 อัน

การหว่านด้วยวิธีลึกหรือพื้นผิวเช่นเดียวกับการใช้การกรองเมมเบรนดำเนินการตาม GOST 26670

เมื่อใช้วิธีการกรองเมมเบรน ปริมาตรของผลิตภัณฑ์ที่เป็นของเหลวจะถูกกรอง ซึ่งระบุไว้ในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิคสำหรับผลิตภัณฑ์เฉพาะกลุ่ม

4.1.3. ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของ NPs ของจุลินทรีย์กรดแลคติก การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวที่ระบุใน pi 3.2.2. 3.2.6 หรือ 3.2.12

หากหลังจากเติมผลิตภัณฑ์ลงในตัวกลาง Blnckfelat แล้วตัวกลางจะเปลี่ยนสี จากนั้นเติมสารละลายด่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อ (NaOH หรือ KOH) สองสามหยดที่มีความเข้มข้นมวล 50 g/dm 3 ลงไปจนกว่าจะได้สีเดิม บูรณะ

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนของจุลินทรีย์ที่มีกรดแลคติก แทนที่จะทำการเพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว อนุญาตให้เพาะเชื้อด้วยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งตามที่ระบุไว้ในย่อหน้า 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7, 3.2.13 หรือ 3.2.14.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของแบคทีเรีย NPB สกุล Lactobacillus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดใดชนิดหนึ่งที่ระบุไว้ในจ. 3.2.6 หรือ 3.2.12

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียในสกุล Lactobacillus แทนที่จะฉีดวัคซีนในอาหารเหลว การฉีดวัคซีนด้วยวิธีลึกจะดำเนินการใน agarizova ของสื่ออื่น ๆ ที่ระบุไว้ในนั้น 3.2.7 หรือ 3.2.13

ในการตรวจสอบการมีอยู่ของแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc การฉีดวัคซีนจะดำเนินการในอาหารเหลวที่ระบุในและ 3.2.4.

ในการตรวจสอบการมีอยู่แทนการใช้สื่อที่เป็นของเหลว เช่นเดียวกับการนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Leuconostoc บนจานเพาะเชื้อหรือใช้วิธีการกรองด้วยเมมเบรน การเพาะเชื้อจะดำเนินการด้วยวิธีพื้นผิวบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ใน และ 3.2.10.

สำหรับการพิจารณาการมีอยู่หรือการนับจำนวนของ Streptococci ของกลุ่ม N ของสกุล Streptococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.11 และสำหรับ S.thermophilus ให้ใช้สื่อตาม และ. 3.2.16.

ในการตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Pediococcus การฉีดวัคซีนจะดำเนินการโดยวิธีลึกในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นตามที่ระบุไว้ในวรรค 3.2.3

4.1.4. การเพาะเลี้ยงเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือจำนวนของจุลินทรีย์กรดแลคติก แบคทีเรียสกุล Lactobacillus streptococci ของกลุ่ม N สกุล Streptococcus ฟักตัวไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (30±1) *C หรือไม่เกิน 3 วันที่อุณหภูมิ (37±1) *C; การเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียสกุล Leuconostoc จะถูกบ่มไม่เกิน 5 วันที่อุณหภูมิ (22±1) *C พืชสำหรับการระบุการมีอยู่หรือการนับจำนวนของเชื้อ S.thermophilus ที่ฟักตัว (48±3) ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ (45±1) *C การเพาะเชื้อบนจานเพาะเชื้อเพื่อตรวจสอบการมีอยู่หรือนับจำนวนแบคทีเรียในสกุล Leuconostoc จะถูกบ่มกลับหัว

การฟักตัวของเชื้อบนอาหารเหลวจะหยุดลงเมื่อสัญญาณที่มองเห็นได้ปรากฏขึ้น

การนับโคโลนีเบื้องต้นบนอาหารเลี้ยงเชื้อจะดำเนินการหลังจาก 48 ชั่วโมง

4.1.5. ในพืชบนอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อพิจารณาการมีอยู่หรือการนับจำนวนของจุลินทรีย์กรดแลคติก, แบคทีเรียในสกุล Lactobacillus, Pediococcus, Streptococcus กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus S.thermophilus. การเข้าถึงถูกจำกัดตาม GOST 30425 หรือด้วยวิธีใดวิธีหนึ่งต่อไปนี้:

บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่แข็งตัวในจานเพาะเชื้อ เทคอลัมน์ที่สองของอาหารเหลวที่หลอมเหลวและทำให้เย็นถึง (45 ± I) * C อาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นในปริมาณ 5.0 ซม. 1 แล้วทิ้งไว้จนแข็งตัว:

จานเพาะเชื้อวางอยู่ในสภาพแวดล้อมที่เป็นก๊าซซึ่งประกอบด้วย 95% N 2 และ 5% CO 2:

จานเพาะเชื้อวางอยู่ในเครื่องไร้อากาศ อุปกรณ์ปิดอยู่สร้างสุญญากาศ 86.6-93.3 kPa โดยใช้ปั๊มสุญญากาศ

พาราฟินเหลวที่ปราศจากเชื้อถูกเติมลงในหลอดทดลองแต่ละหลอดด้วยของเหลวในปริมาณที่จำเป็นเพื่อให้ได้คอลัมน์สูงประมาณ 2 ซม.

4.1.6. วัฒนธรรมบนตัวกลางที่เป็นของเหลวจะถูกสแกนทุกวันและเก็บหลอดที่มีสัญญาณการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ ธรรมชาติของการเจริญของอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลวแสดงไว้ในภาคผนวก 2 จากหลอดทดลองที่มีสัญญาณของการเจริญเติบโต การเพาะเลี้ยงย่อยจะดำเนินการกับอาหารเลี้ยงเชื้อ agarizonaine (ดูย่อหน้าที่ 4.1.3) โดยมีวงจรแบคทีเรียดังนี้ เพื่อให้ได้การเติบโตของอาณานิคมที่แยกได้ แต่ยังมีการบ่มพืชผลอีกด้วย 4.1.4.

4.1.7. มีการดูพืชผลบนอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจากการบ่มและเลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับ ซึ่งมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะตั้งแต่ 15 ถึง 150 อาณานิคม

เมื่อกำหนดจำนวนของจุลินทรีย์โดยวิธีการกรองเมมเบรน อนุญาตให้เลือกจานเพาะเชื้อสำหรับการนับหากมีโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะน้อยกว่า 15 กลุ่มที่เติบโตบนตัวกรอง

ลักษณะของโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะได้รับในภาคผนวก 2

4.1.8. เพื่อยืนยันว่าโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะเป็นของจุลินทรีย์กรดแลคติกหรือแบคทีเรียในสกุลแลคโตบาซิลลัส Leuconostoc Pediococcus Streptococcus กลุ่ม N ของสกุล Streptococcus S.thermophilus คัดเลือกจากพืชไร่และ 4.1.7 หรือ 4.1.6 อย่างน้อย 5 โคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ การเป็นเจ้าของของแต่ละอาณานิคมที่เลือกของจุลินทรีย์บางชนิดนั้นถูกสร้างขึ้นโดยสัมพันธ์กับคราบแกรม ความคล่องตัว, การปรากฏตัวของ catalase, นอกจากนี้, เมื่อระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostos, การปรากฏตัวของแคปซูลจะถูกกำหนด;

287

คอฟของสายพันธุ์ S.thermophilus และกลุ่ม N streptococci ของสกุล Streptococcus - การปรากฏตัวของการเจริญเติบโตในน้ำซุปเนื้อและเปปโตนที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเนื้อและเปปโตนที่มี NaCl 6.5%

4.1.8.1. ในการกำหนดอัตราส่วนของจุลินทรีย์ต่อคราบแกรมเตรียมรอยเปื้อนจากโคโลนีย้อมสีตาม GOST 30425 และกล้องจุลทรรศน์

4.1.8.2. เพื่อศึกษาการเคลื่อนที่ของจุลินทรีย์จากโคโลนี การเตรียมจะเตรียมโดยวิธีการแขวนหรือหยดแบบบดแล้วส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ผลลัพธ์ของกล้องจุลทรรศน์ได้รับการประเมินตามภาคผนวก I

4.1.8.3. กิจกรรม catalase ของวัฒนธรรมถูกกำหนดตาม GOST 30425

ผลลัพธ์ของการกำหนดกิจกรรมของ catalase ได้รับการประเมินตามภาคผนวก 1

Rakhtozhenne ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในแบคทีเรียสกุล ;! Pediococcus อาจเกิดจากเอนไซม์ pseudocatalase ดังนั้นเมื่อพิจารณาจุลินทรีย์กรดแลคติกหรือแบคทีเรียสกุล Pediococcus หากพบจุลินทรีย์แกรมบวกและไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ในโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ เห่าปฏิกิริยา catalase ในเชิงบวก ควบคุมการไม่มีไซโตโครมโดยการตั้งค่าการทดสอบเบนซิดีน สำหรับสิ่งนี้ แบคทีเรียอายุ 24-48 ชั่วโมงทรงเครื่อง) ที่เลี้ยงบนจานเลี้ยงเชื้อจะถูกเทด้วยสารละลายเบนซิดีน ระบุไว้ในข้อ 3.1.9 หลังจากที่สารละลายได้แช่โคโลนีแล้ว ให้เติมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 5% ในปริมาตรเท่ากันโดยประมาณลงในจาน จุลินทรีย์กรดแลคติกรวมถึงแบคทีเรียสกุล Pediococcus ไม่มีไซโตโครม เมื่อมีไซโตโครม โคโลนีจะย้อมสีเขียวอมฟ้าหรือสีน้ำเงินสด

ในกรณีที่ไม่มีเบนซิดีนจะได้รับอนุญาตให้ตรวจสอบการมีอยู่ของ nsepdoc galase บนตัวกลางของย่อหน้า 3.2.15 ที่มีความเข้มข้นต่ำของกลูโคส - 0.05%

พืชผลได้รับการบ่มตามข้อ 4.1.4 การตรวจหา iseudocatalase นั้นดำเนินการในลักษณะเดียวกับ catalase ตาม GOST 30425

เชื้อ Pseudocatalase ที่ผลิตได้อยู่ในสกุล Pediococcus

4.1.8.4. เมื่อทำการระบุแบคทีเรียประเภท Leuconostoc จะมีการเตรียมการและย้อมด้วย Buri เพื่อระบุแคปซูลของแบคทีเรีย ในการทำเช่นนี้ จะมีการผสมแบคทีเรียหนึ่งหยดบนสไลด์แก้วที่ละลายไขมันดีแล้วกับผงหมึกสีดำละเอียดหรือสารแขวนลอยของนิโกรซีน

ด้วยความช่วยเหลือของแก้วอีกใบที่มีขอบกราวด์จะมีการเตรียมสเมียร์บาง ๆ อย่างรวดเร็วซึ่งจะแก้ไขได้โดยการส่งผ่านเปลวไฟของเตาหลายครั้ง รอยเปื้อนนั้นถูกย้อมด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเลตหรือสารละลายคาร์โบลฟุคซิน ล้างอย่างระมัดระวังในภาชนะที่มีน้ำ ปล่อยให้อากาศแห้งและส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ ไม่อนุญาตให้ทำให้รอยเปื้อนระหว่างแผ่นกระดาษกรองแห้ง พื้นหลังของการเตรียมถูกย้อมด้วยหมึกสีดำหรือไทโรซีนบาง ๆ ร่างกายของแบคทีเรียถูกย้อมด้วยสีเดียว แคปซูลยังไม่เปื้อน

4.1.8.5. เมื่อระบุ Streptococci ของกลุ่ม N genus;! Streptococcus, Streptococci ของสายพันธุ์ S. thennophilus กำหนดว่าไม่มีการเจริญเติบโตในน้ำซุปเนื้อเพย์ตันที่มีค่า pH 9.6 และในน้ำซุปเพย์โทนเนื้อที่มีโซเดียมคลอไรด์ 6.5%

สำหรับวัฒนธรรมนี้ตาม n. 4.1.8 วัฒนธรรมย่อยบนสื่อที่ระบุในจ. 3.2.8 และ 3.2.9

พืชผลจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ (30 ± 1)'C เป็นเวลา 3 ปี และเมื่อระบุเชื้อ S. thennophilus พืชผลจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ (45 ± 1) °C เป็นเวลา 3 วัน

4.2. การทดสอบผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

4.2.1. การเตรียมการเจือจางผลิตภัณฑ์หมัก (แห้งและของเหลว) ตาม GOST 9225

สำหรับการเตรียมการเจือจางของเชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น และการเตรียมแบคทีเรียด้วยนม! ขอบของขวดและถุงถูกเช็ดด้วยแอลกอฮอล์, ขอบของขวดถูกเผาและเอาไม้ก๊อกออก, ขอบของถุงถูกตัดด้วยกรรไกรตัดไฟ, 1 กรัมของวัสดุทดสอบจะถูกชั่งน้ำหนักเป็นหมัน หรือ flambéปูน, ปิดด้วยฝาจากจานเพาะเชื้อหรือกระดาษปลอดเชื้อ, บดให้ละเอียดโดยเติมสารละลายคลอไรด์โซเดียมหรือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตจำนวนเล็กน้อยจากขวดที่มีสารละลายหรือบัฟเฟอร์ขนาด 99 มล. สารแขวนลอยเทลงใน กระติกน้ำที่มีสารละลายโซเดียมคลอไรด์หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่เหลืออยู่และได้รับการเจือจางครั้งที่สองของ I: 100

และการเจือจางครั้งที่สองของผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียในมดลูกจะเตรียมการเจือจางต่อไปนี้ตามจำนวนของแบคทีเรียในมดลูกที่ระบุในเอกสารกำกับดูแลและทางเทคนิค patzuyastable ฉัน.

4.2.2. การหว่านเพื่อนับจำนวนของแลคติกสเตรปโทคอกคัสนั้นดำเนินการในอาหารเลี้ยงเชื้อที่แนะนำหรืออาหารเหลวที่เตรียมไว้ตามนี้ 3.3.2 และ 3.3.3. และการหว่านเพื่อนับจำนวนกรดแลกติกบด - ในอาหารเหลวที่เตรียมตามข้อ 3.3.3

สำหรับการเพาะในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้น จะมีการเลือกใช้การเจือจางเมื่อเพาะเมล็ด จาก 15 ถึง 150 โคโลนีจะเติบโตบนจาน

จากแต่ละตัวอย่าง การฉีดวัคซีนทำตาม GOST 9225 1 ซม. 3 ของการเจือจางที่สอดคล้องกันของผลิตภัณฑ์ (ดูตารางที่ 1) บนจานเลี้ยงเชื้อ

เมื่อหว่านในอาหารเหลวจากการเจือจางสามหรือสี่ครั้งล่าสุด (ดูตารางที่ I) ให้เพิ่ม 1 ซม. "ของการเจือจางแต่ละครั้งลงในหลอดทดลองคู่ขนานกับนมไขมันต่ำที่ปราศจากเชื้อ

4.2.3. หลอดทดลองหรือจานเพาะเชื้อที่มีพืชผลจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทและบ่มที่อุณหภูมิ (30±1) *C สำหรับการนับแบคทีเรียกรดแลคติคชนิดมีโซฟิลิก ที่อุณหภูมิ (40±1) *C สำหรับการนับแบคทีเรียกรดแลกติกที่ทนความร้อนและ ที่ (32±1) *C สำหรับการแจกแจงร่วมกันของแบคทีเรียกรดแลกติกประเภทเมโซฟิลิกและเทอร์โมฟิลิก เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 72 ชั่วโมง

5. การประมวลผลผลลัพธ์

5.1. การประมวลผลผลการวิเคราะห์อาหาร (ยกเว้นผลิตภัณฑ์นมหมัก เชื้อเริ่มต้น แบคทีเรียเข้มข้น การเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก)

5.1.1. ผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์อาหารจะได้รับการประเมินสำหรับแต่ละตัวอย่างแยกกัน

5.1.2. เมื่อศึกษาคุณสมบัติทางวัฒนธรรม สัณฐานวิทยา และชีวเคมีในการพิจารณา:

พบเชื้อจุลินทรีย์กรดแลคติกแกรมบวก แท่งที่ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสลบหรือไม่สร้างสปอร์ แกรมบวก ไม่เคลื่อนที่, คาตาเลสลบหรือ cocci ก่อตัวหลอก kagal azu, สรุปได้ว่า ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบคือกรดแลคติก

แบคทีเรียสกุลแลคโตบาซิลลัสพบว่าไม่สร้างสปอร์ เป็นแกรมบวก ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ catalase-negative rods แล้วให้ข้อสรุปว่า ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบอยู่ในสกุลแลคโตบาซิลลัส

พบแบคทีเรียสกุล Lcuconostoc ชนิดไม่สร้างสปอร์ เป็นแกรมบวก immobile, catalase-negative, cocci ล้อมรอบด้วยแคปซูลแล้วให้ข้อสรุปว่า ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบอยู่ในสกุล Leuconostoc:

แบคทีเรียสกุล Streptococcus group N พบว่าไม่สร้างสปอร์ แกรมบวก เคลื่อนที่ไม่ได้ เร่งปฏิกิริยาเป็นลบ ไม่เติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และ NaCI 6.5% cocci แล้วให้ข้อสรุปเกี่ยวกับเรื่องนี้ ว่าเชื้อจุลินทรีย์ที่พบอยู่ในสกุล Streptococcus group N;

พบแบคทีเรียสกุล Pediocoecus ที่ไม่สร้างสปอร์ เป็นแกรมบวก immobile, catalase-positive (หรือ catalase-positive แต่ให้ผลการทดสอบเบนซิดีนเป็นลบ) หรือ pseudo-catalase-positive cocci ให้ข้อสรุปเกี่ยวกับสิ่งนั้น ว่าจุลินทรีย์ที่ตรวจพบอยู่ในสกุล Pediocoecus;

พบว่าแบคทีเรียสายพันธุ์ S.thermophilus ไม่สร้างสปอร์ ฟามโพสิทีฟ นิ่ง ตัวเร่งปฏิกิริยาเป็นไนโตรเจนเชิงลบ lermophilic cocci ที่ไม่เติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีค่า pH 9.6 และ NaCl 6.5% พวกเขาให้ข้อสรุป ว่าเชื้อจุลินทรีย์ที่ตรวจพบอยู่ในสายพันธุ์ Streptococcus themiophilus

5.1.3. หากมีการยืนยัน mri ของโคโลนีลักษณะเฉพาะใน 80% ของกรณี นั่นคืออย่างน้อย 4 ใน 5 โคโลนี มีการยืนยันการเจริญเติบโตของกลุ่มหรือสกุลของจุลินทรีย์บางกลุ่ม ก็จะถือว่าโคโลนีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่เติบโตบนจาน อยู่ในกลุ่มสกุลหรือสปีชีส์นี้ ในกรณีอื่นๆ จำนวนของจุลินทรีย์จะถูกกำหนดตามเปอร์เซ็นต์ของโคโลนีที่ยืนยันต่อจำนวนโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะทั้งหมดที่นำมาเพื่อยืนยัน

5.1.4. เมื่อพิจารณา MPN หรือเมื่อฉีดวัคซีนผลิตภัณฑ์บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลว หลอดจะถือว่าเป็นผลบวก หากระหว่างการชุบซ้ำบนอาหารเลี้ยงเชื้อในภายหลังและการยืนยันโคโลนีที่มีลักษณะเฉพาะ จุลินทรีย์ของกลุ่ม สกุล หรือสปีชีส์ที่กำหนดพบในโคโลนีลักษณะเฉพาะอย่างน้อยหนึ่งโคโลนี .

5.1.5. จำนวนจุลินทรีย์ที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ถูกกำหนดโดยจำนวนหลอดทดสอบที่เป็นบวกตาม GOST 30425

หากการเจือจางสิบเท่าที่เลือกสำหรับการเพาะสูงกว่า เช่น 10 -5 10 "4 และ 10" \ จากนั้นค่าแบบตารางของความถี่ต่ำจะคูณด้วยผลต่างระหว่างการเจือจางสิบเท่าที่เลือกและแบบตาราง นั่นคือ 100

หากการเจือจาง 10 เท่าที่เลือกสำหรับการฉีดวัคซีนมีค่าต่ำกว่า เช่น 10° (1 กรัม) 10“". 10 ~ 2 จากนั้นค่าแบบตารางของ MPN จะถูกหารด้วยความแตกต่างระหว่างการเจือจางสิบเท่าที่เลือกและแบบตาราง นั่นคือ 10

5.1.6. ผลลัพธ์ของการกำหนดจำนวนจุลินทรีย์โดยวิธีการเพาะเชื้อในจานเพาะเชื้อหรือโดยวิธี H HF หรือการใช้วิธีการกรองเมมเบรนจะถูกคำนวณใหม่สำหรับ I g หรือ 1 ซม. "ของผลิตภัณฑ์และบันทึกตามข้อกำหนดของ GOST 26670 .

5.1.7. ผลลัพธ์ของการพิจารณาการมีอยู่ของจุลินทรีย์ในตัวอย่างเฉพาะของผลิตภัณฑ์แสดงไว้ดังนี้ จุลินทรีย์กรดแลคติก (หากจำเป็น ให้ระบุสกุลหรือชนิด) พบหรือไม่พบในตัวอย่างผลิตภัณฑ์

5.2. ประมวลผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์นมหมัก สารตั้งต้น สารเข้มข้นของแบคทีเรีย และการเตรียมแบคทีเรียของแบคทีเรียกรดแลคติก

5.2.1. ด้วยการพัฒนาของแบคทีเรียกรดแลคติคในนมเหลวขนาดกลาง นมจะจับตัวเป็นก้อน

ในการคำนวณจำนวนแบคทีเรียกรดแลคติกทั้งหมด (สเตรปโทคอกคัสและแบคทีเรียชนิดแท่ง) ให้สังเกตการเจือจาง 3 ครั้งหลังสุดของนมที่ทำให้นมเปรี้ยว

สร้างตัวเลข ประกอบด้วยตัวเลขสามหลักที่ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวในการเจือจางสามครั้งล่าสุด ตัวเลขตัวแรกของลักษณะตัวเลขสอดคล้องกับการเจือจางที่นมจับตัวเป็นก้อนในหลอดทดลองสองหลอด ตัวเลขต่อไปนี้ระบุจำนวนหลอดทดลองที่มีนมเปรี้ยวในการเจือจางสองครั้งถัดไป

ตามลักษณะตัวเลขตามตาราง. 2 หาจำนวนจุลินทรีย์กรดแลกติกที่เป็นไปได้มากที่สุด ซึ่งคูณด้วยการเจือจางที่ตัวเลขตัวแรกของลักษณะตัวเลขเริ่มต้นขึ้น

ตารางไม่รวมชุดค่าผสมที่ยอมรับไม่ได้

จำนวนผลลัพธ์จะสอดคล้องกับจำนวนเซลล์แบคทีเรียกรดแลคติกใน 1 กรัมหรือ 1 ซม. 'ของผลิตภัณฑ์

สิ่งพิมพ์อย่างเป็นทางการห้ามพิมพ์ซ้ำ

© สำนักพิมพ์มาตรฐาน. 1989 © STANDARTINFORM. 2553

เมื่อวันที่ 1 กรกฎาคม 2545 GOST 24104 - 2544 มีผลบังคับใช้ GOST R 53228-2008 มีผลบังคับใช้ในดินแดนของสหพันธรัฐรัสเซีย

ในอาณาเขตของสหพันธรัฐรัสเซีย